[发明专利]用于产生源自干细胞的细胞外囊泡的方法

说明书

提供了用于通过使用三维细胞培养过程产生源自干细胞的细胞外囊泡的方法、干细胞的三维细胞聚集体在产生细胞外囊泡中的用途、包含高浓度细胞外囊泡的干细胞的三维细胞聚集体的培养物，以及包含所述培养物的药物组合物。

技术领域

本公开涉及一种使用三维细胞培养过程产生源自干细胞的细胞外囊泡的方法、干细胞的三维细胞聚集体在产生细胞外囊泡中的用途、包含高浓度细胞外囊泡的干细胞的三维细胞聚集体的培养物，以及包含所述培养物的药物组合物。

背景技术

作为用于治疗无法治愈/难治性疾病的新范例，成人干细胞疗法已广泛应用于临床试验，并已报道了许多成功病例。

然而，存在离体培养以增殖从患者或供体中提取/选择的干细胞期间，由异种血清(例如，胎牛/小牛血清)的内化引起的人畜共患病问题；当干细胞被移植到体内时，由干细胞特征(诸如有力的增殖能力、相对大的细胞大小等)引起的肿瘤形成问题；风险因素(诸如导致梗塞的血管闭塞等)，并且因此，有必要找到用于成功进行干细胞注射/移植的疗法的解决方案。

此外，干细胞疗法的多功能性存在限制，因为当应用使用自体干细胞的疗法时，干细胞在干细胞的细胞外增殖能力、对病变的迁移能力、治疗因子分泌能力等方面的治疗功效在患者之间不同。

因此，已积极地进行了许多研究以避免可能由直接使用上述活干细胞引起的各种风险因素或问题。一些研究已报道了源自干细胞的细胞外囊泡可代替干细胞的治疗功能的结果(细胞和分子生命科学(Cell.Mol.Life Sci.)(2011)68:2667–2688)。

已出现了使用源自干细胞的细胞外囊泡的疗法，其可代替活干细胞的直接注射/移植。所述疗法在临床前试验中显示出许多功效，并且据报道一些病例已进入临床试验。

通过从患者或供体中提取和选择干细胞并使其在二维培养板中增殖来进行现有的干细胞培养。已知当在实验室中在二维培养板中培养成体干细胞时，生物学特性诸如原始干细胞能力和治疗因子分泌能力显著降低。

源自干细胞的细胞外囊泡的多项临床前研究已证明了它们的治疗功效，但通过现有二维培养技术在实验室中培养的干细胞具有非常低的细胞外囊泡分泌能力。因此，存在的问题是细胞外囊泡的产率太低而不能用作治疗剂。最近，据报道，通过在低氧条件下培养间充质干细胞，相当成功地增强了干细胞的细胞外囊泡分泌。然而，产率仍然很低，并且不足以应用于临床治疗。

为了将治疗性源自干细胞的细胞外囊泡的应用范围从研究阶段扩展到实际临床治疗，需要开发以足以向患者施用的量大量生产细胞外囊泡的技术。

发明内容

技术问题

为了解决这种低产率的问题，提供了一种以临床适用规模大量生产源自干细胞的细胞外囊泡的方法，其中进行干细胞的三维培养以形成类似于体内环境的条件，从而增加干细胞的活性和功能性。

一方面提供了一种产生源自干细胞的细胞外囊泡的方法，所述方法包括进行干细胞的三维培养。

另一方面提供了一种用于产生源自干细胞的细胞外囊泡的组合物，所述组合物包含通过干细胞的三维培养形成的干细胞聚集体。

又一方面提供了通过干细胞的三维培养形成的干细胞聚集体在产生源自干细胞的细胞外囊泡中的用途。

又一方面提供了一种通过培养干细胞聚集体获得的培养物。

又一方面提供了一种包含通过培养干细胞聚集体获得的培养物的药物组合物。

技术方案