[发明专利]具有延长的半衰期及降低的配体结合性质的因子VIII

说明书

本发明涉及将水溶性聚合物缀合至治疗蛋白质的氧化碳水化合物部分的材料和方法，其包括使氧化碳水化合物部分与活化的水溶性聚合物在允许缀合的条件下接触。更具体而言，本发明涉及具有延长半衰期和降低的配体结合性质的经修饰的重组因子VIII(FVIII)。

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年12月3日提交的美国临时专利申请第62/262,674号的优先权，所述申请以引用的方式并入本文中。

技术领域

本发明涉及用于延长因子VIII(FVIII)的半衰期的材料和方法。

背景技术

在患有A型及B型血友病的人群中对于出血的已认可治疗和/或预防经常包括因子替代疗法。这涉及凝血蛋白诸如因子VIII(FVIII)和因子IX(FIX)的输注(注射至血流中)。这些蛋白质通常来自两个来源：从人血浆分离和在遗传工程化细胞系中表达。因为缺失的凝结因子的替代物并非永久的，所以接受这类治疗的患者必须反复输注因子。

治疗蛋白质诸如FVIII之药理学及免疫学性质可通过化学修饰和与聚合物化合物进行缀合来改进。聚唾液酸(PSA)也称为多聚唾液酸(CA)，是天然产生的多糖。它是具有α(2→8)酮苷键的N-乙酰神经氨酸的均聚物并且在其非还原末端含有邻位二醇基团。此聚合物带有负电荷并且为人体的天然成分。其可容易地从细菌大量地产生并且具有预先确定的物理特性(美国专利第5,846,951号)。细菌产生的PSA是由与在人体中产生的PSA相同的唾液酸单体组成。不同于一些聚合物，PSA为可生物降解的。

多聚唾液酸与过氧化氢酶和天冬酰胺酶的共价偶合已被证明可增加在存在蛋白分解酶或血浆的情况下的酶稳定性。聚唾液酸化与未经修饰天冬酰胺酶的体内比较研究揭示聚唾液酸化可增加酶的半衰期(Fernandes及Gregoriadis,Int J Pharm.2001,217,215-24)。

仍然需要开发用于缀合水溶性聚合物与蛋白质从而改进蛋白质的药效学和/或药代动力学性质，同时将与各种试剂有关的成本降至最低并将对患者接受者的健康风险降至最小的材料和方法。

发明内容

本发明提供用于缀合聚合物与蛋白质以改进蛋白质的体内半衰期、药效学和/或药代动力学性质的材料和方法。

在一个实施方案中，提供一种经修饰的因子VIII(FVIII)。所述经修饰的FVIII包含延长FVIII半衰期并减少经修饰的FVIII与结合FVIII的配体的结合的修饰。示例性配体选自冯威勒布兰德(von Willebrand)因子(VWF)和低密度脂蛋白(LDL)受体相关蛋白1(LRP1)。示例性修饰在本文中论述并且包括例如化学修饰，诸如水溶性聚合物的连接。

在示例性实施方案中，经修饰的FVIII为来源于血浆的。在示例性实施方案中，FVIII是由工程化宿主细胞重组产生。在各种实施方案中，经修饰的FVIII包括完整的B结构域。在各种实施方案中，FVIII为全长FVIII并且包括完整的B结构域。

在示例性实施方案中，经修饰的FVIII以与未经修饰的FVIII相比较低的亲和力(KD)结合至VWF和LRP1。

在示例性实施方案中，经修饰的FVIII包含与其缀合的聚唾液酸(PSA)。在这个实施方案中使用的示例性PSA部分具有约20kDa的平均分子量。在示例性实施方案中，PSA具有选自以下的平均分子量：约5、约10、约15、约20、约25、约30、约35、约40或约50kDa。在示例性实施方案中，PSA具有低的多分散性。示例性PSA缀合物包括介于PSA与FVIII分子之间的氨基氧基连接基。示例性氨基氧基连接基係连接至经修饰的FVIII的氧化碳水化合物。

本发明还提供一种药物组合物。示例性药物制剂包括上述经修饰的FVIII和药学上可接受的载体、稀释剂、盐、缓冲剂和/或赋形剂。