[发明专利]减少免疫测定法中的干扰的方法

说明书

本发明涉及一种免疫测定方法，用于通过将怀疑含有分析物如抗原或抗体的分离样品与多种结合配偶体孵育来检测所述样品中的所述的分析物，所述结合配偶体之一携带可检测标记，其中添加不携带标记但结合所述可检测标记的标记特异性结合配偶体。该方法可应用于大量多样的分析物，并且已证明对于由于病原体感染而存在于样品中的IgG和IgM类分析物抗体特别有用。本发明进一步涉及用于所述方法的试剂盒，包含至少两种分析物特异性结合配偶体，其中一种携带可检测标记，以及结合所述可检测标记但本身不携带可检测标记的标记特异性结合配偶体。此外，本发明涵盖在体外诊断测试中不携带可检测标记的标记特异性结合配偶体的用途，用于消除样品中存在的由抗标记抗体引起的干扰。

发明领域

本发明涉及用于减少免疫测定法中的干扰的方法，所述干扰是由于结合至可检测标记的干扰因子引起，其中所述可检测标记用于直接或间接检测分析物。更具体地说，本发明涉及用于检测分析物的免疫测定方法，在一个实施方案中，所述分析物是分离的样品中的抗体或抗原，通过将所述样品与多种结合配偶体孵育，来检测所述样品中的抗体或抗原，其中一种结合配偶体携带可检测标记，其中添加不携带标记但与所述可检测标记结合的标记特异性结合配偶体。

发明背景

用于消除免疫诊断测定法中的干扰的方法是本领域中公知的并且已经被详细描述。例如参见Park和Kricka(The Immunoassay Handbook Elsevier Ltd.2013，第5.3章，第403-415页)。特别是基于固相的免疫测定法，即所谓的异质测定法，会受到各种干扰，这些干扰可导致假阳性或假阴性测定结果、高背景信号、降低的测定敏感性和动力学、缺乏试剂稳定性以及这些试剂缩短的贮存期限。非特异性干扰通常由测定组分与独立于分析物存在的固相材料的非特异性结合而引起。另一个干扰源是类风湿因子、抗IgM抗体或抗动物抗体(嗜异性抗体)如人抗小鼠抗体(HAMA)的存在。

另一个常见的干扰源是免疫测定中使用的信号发生组分。已知的产生信号的化合物例如是基于荧光、比色、化学发光或电化学发光原理发光的酶或标记。特别是对于电化学发光化合物，现有技术中已经描述了由于与信号发生化合物的非特异性结合引起的干扰(Ando等人，Intern Med 2007，46(15)：1225-1229；Sapin等人，Clin Chem Lab Med 2007；45(3)：416-418)。

为了避免基于信号发生组分的干扰，常常将过量的与所述信号发生组分连接的载体蛋白添加到免疫测定混合物中。结果，干扰化合物或因子结合到与游离载体蛋白质连接的所述信号发生组分。在这种措施不足以消除干扰的情况下，也可以将物质添加到免疫测定混合物中，所述物质在结构上与真实信号发生组分相似但自身不提供任何信号。结果，样品中存在的干扰因子以定量的方式与过量的类似化合物结合并且不与真正的靶标即信号发生化合物结合。因此可以抑制干扰。例如在美国专利号5888745和其等同的DE 195 19973中已经描述了这种操作。在这些文献中公开了一种确定分析物的方法，其中分析物特异性结合的物质附着于能够提供发光信号的含金属络合物上。在所述方法中，将与第一含金属络合物结构相关但不结合分析物的第二含金属络合物添加到待研究的样品中。该第二含金属络合物有助于减少第一含金属络合物信号的猝灭。

然而，虽然可获得用于消除干扰的措施，但免疫测定法趋向于显示干扰，这种干扰不能通过简单地向测定混合物中添加与信号发生化合物相似的额外量的竞争性化合物来消除。

因此可见待解决的问题是，增加基于发射可检测信号的免疫测定法的特异性。

当将一种化合物添加到免疫测定法中，这种化合物与导致问题的标记本身结合时，干扰就会减少。这是令人吃惊的，因为我们的预期是标记本身将被遮蔽和屏蔽，从而屏蔽的标记不再可以生成可检测光信号或者只有不足够的可检测光信号可以生成。

发明概述

本发明基于这样的发现，即通过添加标记特异性结合配偶体将信号发生化合物或可检测标记，特别是附着于结合配偶体的光发生标记从其环境遮蔽和屏蔽。