[实用新型]一种联合定量检测卡

说明书

技术领域

本实用新型涉及微流控技术和免疫荧光技术相结合的技术领域，具体涉及一种联合定量检测卡。

背景技术

近年来因自身免疫障碍而导致的不孕问题越发引起人们的重视，抗精子抗体(AsAb)是免疫性不孕最常见的一种因素。抗精子抗体(AsAb)是一个复杂的病理产物，其作用主要表现为精子凝集、精子制动，影响精子的运送，抑制精子穿透宫颈黏液，限制精子与卵透明带粘附，抑制精子顶体的活性，使精子不易穿透包绕卵细胞的放射冠和透明带，阻碍精子与卵细胞膜的融合，阻止精子与卵子结合等。

抗缪勒管激素是一种不同于睾酮的蛋白质类物质，产生于包括人类在内的所有哺乳类动物的睾丸，它能够导致缪勒管退化。抗缪勒管激素属于转化生长因子β超家族的一种多肽，是由两个相同的70kb亚基组成的二聚糖蛋白，相对分子质量为140 000。其在雄性体内的唯一作用就是导致胎儿体内的缪勒管退化，使其具有男性表型。当缺乏抗缪勒管激素时，缪勒管可发展成为子宫、输卵管和阴道上部。

微流控(Microfluidics)指的是使用微管道(尺寸为数十到数百微米)处理或操纵微小流体(体积为纳升到阿升)的一种技术。当微通道的特征尺寸在微米甚至纳米量级时，微通道表面积与其内部空间的体积之比很大，通道的结构、形状和壁面性质都将对其中的流体流动状态产生极大的影响。流体在微流控的微通道中具有独特的流体性质，如层流和液滴等。借助这些独特的流体现象，微流控可以实现一系列常规方法所难以完成的微加工和微操作。

免疫荧光技术(Immunofluorescence technique)是免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合，使用荧光微球标记已知的抗原或抗体，再用这种荧光抗体(或抗原)作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。在检测过程中，采用荧光微球最佳激发光源进行激发，发射出的荧光经过滤光片后，用CCD扫描技术或光纤技术，将发射光谱收集、聚集和倍增后，转换成数值信号，实时检测荧光变化曲线。

目前市面上尚无抗精子抗体和抗缪勒管激素联合定量检测产品，单独的抗精子抗体检测产品多采用酶联免疫吸附法和浅盘凝集法，单独的抗缪勒管激素检测产品多采用双抗夹心ELISA方法，这些方法尚存在以下方面的不足：

酶联免疫吸附法是采用正常精子膜抗原包被反应板，加待测标本及酶标记二抗底物显色，阳性为明显黄色，阴性孔不显色。此方法无法定量检测抗精子抗体的含量，且操作复杂，且影响因素较多，检测结果易受外界因素的干扰。

浅盘凝集法是将微量正常精子与待测标本在浅盘中混合，镜下观察有无凝集。有活动的凝集精子为阳性。此方法无法定量检测抗精子抗体的含量，且灵敏度低，且较易受到外界因素的干扰。

双抗夹心ELISA法只能定性或者半定量检测血液样本中抗缪勒管激素的含量，而无法精确定量检测。

发明内容

针对以上现有技术问题，本实用新型的目的在于提供一种联合定量检测卡。采用微流控技术和免疫荧光技术制成包括覆有滤纸的加样区、喷涂有不同荧光微球标记的抗精子二抗和抗缪勒管激素抗体的结合区、并联微通道时间阀、包被有抗精子二抗并具有特殊结构的检测区、包被有抗缪勒管激素抗体并具有特殊结构的检测区和废液区的抗精子抗体和抗缪勒管激素联合定量检测卡。具体技术方案如下：

一种联合定量检测卡，包括底卡和面卡，其中，所述底卡上设有加样区，结合区，阀，检测区以及废液区，所述加样区连接结合区且加样区与结合区位于阀的一端，所述检测区连接废液区且位于阀的另一端；所述面卡上设有加样孔和检测孔，所述底卡和面卡的背面扣合连接。

进一步地，所述加样区覆有滤纸。

进一步地，所述检测区包括第一检测区和第二检测区共两个检测区。

进一步地，所述阀为并联微通道时间阀。

进一步地，所述结合区和检测区分别设置于并联微通道时间阀的两端并直接连接至并联微通道时间阀。

进一步地，所述微通道时间阀为通过软光刻技术制成的微通道。

进一步地，两条并联微通道时间阀宽度均为3μm。

进一步地，所述滤纸直径1.5cm、孔径为1～3μm。

进一步地，所述检测区带有弯型通道。

上述抗精子抗体和抗缪勒管激素联合定量检测卡的制作方法，包括如下步骤：

(1)制作底卡模板；

(2)制备不同荧光微球标记的抗精子二抗和抗缪勒管激素抗体混合液；

(3)喷涂抗体混合液；

(4)包被抗体；

(5)滤纸粘覆；