[实用新型]一种ERCC1基因多态性扩增检测试剂盒

说明书

技术领域

本实用新型属于生物技术领域，具体涉及一种ERCC1基因多态性扩增检测试 剂盒。

背景技术

铂类药物是对具有生物活性的含铂化合物药物的总称，是最常用的肿瘤化疗 药物之一，包括顺铂、卡铂和奥沙利铂等。其药理学机制主要是通过引起肿瘤细 胞内DNA的交联，形成链内/链间DNA加合物抑制细胞，阻碍DNA合成与复制， 从而抑制肿瘤细胞的生长。但因治疗过程中伴发严重的胃肠道反应、肾及神经毒 性，临床往往因为患者无法耐受而被迫终止铂类药物的治疗，同时也发现相当一 部分患者对铂类药物产生耐药性。对铂类药物的抵抗可通过以下机制发生：减少 药物积聚、通过共轭结合解除药物毒性，提高对铂类药物诱导产生的DNA加合物 的耐受性，或者提高DNA修复能力。科学研究证明铂类药物的疗效和副作用存在 显著地个体差异：患者本身遗传特征的差异是主要的原因之一，主要涉及DNA 修复相关基因和解毒酶相关基因的多态性及表达量。经大量研究证实，ERCC1基 因是铂类药物疗效检测主要靶标之一(EvansWE,RellingMV,Pharmacogenomics: translatingfunctionalgenomicsintorationaltherapeutics. Science[J].1999,286:487–491)。

切除修复交叉互补基因1(excisionrepaircross-complementingrodent repairdeficiency，complementationgroup1，ERCC1)是核苷酸外切修复家 族中的重要成员。核苷酸切除修复(NER)是最重要的细胞修复，在NER途径中， ERCC1基因发挥了重要作用，对肿瘤细胞的影响表现为对铂类药物的敏感性的高 低不同。ERCC1基因多态性可以改变ERCC1的DNA修复能力，其第118密码子C>T 突变后，能够影响ERCC1基因表达的蛋白质水平，其中T等位基因ERCC1mRNA 水平更高，则会有更强的DNA修复能力。可导致患者铂类药物化疗的敏感性下降， 疗效降低。因此，检测ERCC1基因第118密码子C>T基因多态性具有很强的临床 实用价值(ShirotaY1,StoehlmacherJ,BrabenderJERCC1andthymidylate synthasemRNAlevelspredictsurvivalforcolorectalcancerpatients receivingcombinationoxaliplatinandfluorouracilchemotherapy.JClin Oncol.2001Dec1；19(23):4298-304)。

实用新型内容

本实用新型的目的：提供一种ERCC1基因多态性扩增检测试剂盒，能较好的 应用于ERCC1基因第118密码子C>T基因多态性检测，体积小，便于运输携带和 使用，克服了目前对ERCC1检测特异性不强，检测成本高且方法较复杂的不足之 处。

为实现上述目的，本实用新型采用以下技术方案：

一种ERCC1基因多态性扩增检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括： 盒体(1)、衬垫(2)，所述的衬垫(2)置于盒体(1)内，衬垫(2)上设有容 器孔装有DNA提取试剂的可立冻存管(3)，装有PCR反应液的可立冻存管(4)、 装有阳性对照1的可立冻存管(5)、装有阳性对照2的可立冻存管(6)、装有阳 性对照3的可立冻存管(7)、装有阴性对照的可立冻存管(8)。试剂盒结构如图 1所示。

上述的装有DNA提取液和PCR反应液的可立冻存管为2ml可立冻存管，装有 阳性对照1、阳性对照2、阳性对照3、阴性对照的可立冻存管均为0.5ml可立 冻存管。

上述的PCR反应液包括DNA聚合酶、UNG酶、引物、探针及Mg2+，所述的探 针为TaqManMGB探针(美国AppliedBiosystems公司生产)。

优选地，所述的阳性对照包括3组，阳性对照1为含野生型纯合子ERCC1 序列的质粒；阳性对照2为含突变体纯合子ERCC1序列的质粒；以及阳性对照3 为等比例混合的阳性对照1和阳性对照2。

进一步优选地，所述的检测试剂盒的检测样本为EDTA(乙二胺四乙酸)抗凝 全血。