[发明专利]一种菜豆高效离体再生体系的建立方法

说明书

本发明提供了一种菜豆高效离体再生体系的建立方法，其包括如下步骤：(1)切取菜豆子叶节置于诱导培养基中培养，培养时间为5‑9天；所述诱导培养基为添加了浓度为1.5‑2.0mg/L 6BA的MS培养基；(2)切除主腋芽后，用与步骤(1)相同的培养基进行继代培养，培养时间为18‑23天；(3)将步骤(2)所得物置于伸长培养基中，培养时间为5‑9天；所述伸长培养基为添加了浓度为0.3mg/L KT的B5培养基；(4)将步骤(3)所得外植体芽置于添加了浓度为1.0mg/L IBA的MSB5培养基，培养时间为12‑16天。本发明对于“超级九粒白”菜豆具有较高的诱导率、伸长率和诱导根数，可实现高效再生体系的建立。

技术领域

本发明属于作物培育领域，具体涉及一种菜豆高效离体再生体系的建立方法。

背景技术

菜豆(Phaseolus vulgaris Linn.)，又称芸豆(俗称二季豆或四季豆)，豆科菜豆属，一年生、缠绕或近直立草本。以食用嫩荚为主，是我国大量种植的豆科作物之一。芸豆原产美洲的墨西哥和阿根廷，我国在16世纪末才开始引种栽培。其色泽嫩绿、肉荚肥厚、味道鲜美、营养丰富，蛋白质含量高，每100克菜豆含蛋白质3～6克，是一种重要的植物蛋白质来源。

传统菜豆栽培种的产量很低，病虫害严重，由于菜豆各种病害的生理小种变异丰富，使得育种工作十分艰难。长期以来，菜豆品种改良大多采用常规育种技术。由于菜豆常规育种存在生长周期长、选育难度大、表现性状后代遗传不稳定等问题。因此在菜豆遗传育种过程中，采用各种生物技术手段进行种质创新，选育出高品质、高产量的抗逆抗病新品种已成为各方菜豆育种研究的焦点。自第一个转基因植物问世以来，植物基因工程技术迅速发展，一些天然的抗虫基因被成功的转入一些作物中。因此，提高菜豆产量、增强抗病性和耐储性最有效的途径就是通过基因工程将抗性基因从其它材料中转入菜豆栽培品种，对其进行遗传改良。

建立高效的再生体系，对于菜豆的育种而言至关重要。不过，高效的再生体系的建立却十分困难，原因之一在于不同基因型的菜豆所适用的再生体系差异较大，且没有确切的规律可循。如研究“Regeneration in Phaseolus vulgaris L.:Promotive role of N6-benzylaminopurine in cultures from juvenile leaves”发现，对于kinghorn菜豆，利用其幼叶叶柄作为外植体，并以加入5μmol/L BAP的MSB5培养基的作为诱导培养基可以诱导愈伤组织；而对于Xan-159菜豆，利用MS+TDZ 0.1mg/L+0.05mg/L IAA和MS+TDZ 0.5mg/L+0.25mg/L IAA对子叶进行诱导才能获得较好的诱导效果(“Plantregeneration fromembryo-derived callus in Phaseolus vulgaris L.(common bean)and P.acutifoliusA.Gray(tepary bean)”)；而对于双青35号菜豆，利用茎段为外植体，利用MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 2.0mg/L进行诱导才获得较好效果(《菜豆(双青35号)再生体系的建立》)；对于哈菜豆1号而言，0.75mg/L IBA和0.02mg/L BA的1/2MS培养基进行生根诱导，可获得84.3％的效率；中国专利CN 104472352 A公布了一种适合于双丰3号的再生体系，其体系也显著的区别于其它基因型菜豆的再生体系。

从上述内容不难发现，对于不同基因型菜豆而言，适合的再生体系的获得没有特定的规律可循，其受基因型、外植体选择和各个阶段培养方式的选择(包括培养基)等因素的影响。这使得菜豆的再生体系的建立面临着不小困难。

发明内容

针对现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种适合于“超级九粒白”菜豆的高效离体再生体系的建立方法，该方法包括如下步骤：

(1)切取菜豆子叶节置于诱导培养基中培养，培养时间为5-9天；所述诱导培养基为添加了浓度为1.5～2.0mg/L 6BA的MS培养基；