[发明专利]一种识别HLA‑A2/NLVPMVATV的单域抗体

说明书

技术领域

本发明属于肿瘤治疗技术领域，特别涉及一种识别HLA-A2/NLVPMVATV的单域抗体。

背景技术

巨细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)为双链DNA病毒，属疱疹病毒科，具有潜伏-活化的生物学特性。它可感染人、牛、马、猪等多种哺乳动物，其中感染人类的CMV称为人巨细胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)，且只有HCMV感染人类。在发达国家HCMV人群感染率在50％以上，而在我国HCMV人群感染率则为70％～90％，儿童感染率较高，流行病学资料显示，大约有30％～70％美国学龄前儿童感染HCMV。先天性及围产期感染HCMV是出生缺陷的主要病毒病因，主要导致肝脏损伤，严重时可伴肝功能衰竭，并发凝血功能异常，并可引起胆道闭锁，甚至危及患儿生命。此外，HCMV感染还能导致神经系统、泌尿生殖系统、肺以及血液系统等病变。

目前认为在正常的易感人群中，感染HCMV后将成为HCMV的终生携带者，呈现为隐性感染的状态。而携带者体内潜伏的HCMV在机体免疫功能处于正常状态时是不具备致病能力的，当携带者处于免疫抑制或者缺陷的时候，体内潜伏的HCMV将可能诱发某些肿瘤。

HCMV感染所致的脑发育畸形表现主要包括头畸形、颅内钙化、脑积水、脑萎缩、脑瘫等，多数在婴儿期即出现明显的症状，CT表现类型包括脑发育异常、脑软化、髓鞘发育迟缓、脑积水(包括梗阻性脑积水和外部性脑积水)和脑萎缩改变等。新生小鼠的感染率最高，未成熟的发育期大脑较成熟大脑更易被感染，且在发育期的小鼠对CMV的敏感性也随着年龄的增长而下降。实验中发现，刚出生即被感染的小鼠脑片中几乎所有细胞都被感染，出生7d的脑片中被感染的细胞有向室管膜下区及皮层下层集中的趋势，而生后14d、21d小鼠脑片被感染的细胞更多分布于室管膜下区，在皮层下层分布较少。虽然还不能解释这种现象，但从中可知，这种空间上的差异性能保护皮层及白质，延迟其遭受病毒侵袭的时间，降低HCMV对神经系统的不可逆损伤。感染发生时细胞所处细胞周期的时相也与感染严重程度密切相关。这种细胞周期时相上的区别是由于细胞周期各时相上发挥作用的不同细胞周期蛋白与HCMV相互作用的结果。

迄今，HCMV感染尚无特效治疗药物。临床上抗病毒疗法中的药物为GCV、缬更昔洛韦、膦甲酸、西多福韦，还可以将更昔洛韦与丙种球蛋白联用治疗HCMV感染，加强疗效。GCV是目前临床上使用的最主要治疗药物，是一种无环鸟苷的衍生物。然而，GCV只能抑制病毒感染，不能彻底消灭病毒。

通过对动物模型和CMV感染者研究发现T细胞免疫应答在抑制CMV复制，阻止其致病方面具有决定性的作用，机体对CMV的免疫应答主要由pp65所介导。Pp65蛋白是病毒颗粒的主要成分，在病毒复制早期就可以观察到，它也是一种较强的抗原，可刺激机体免疫应答，有助于清除病毒。Pp65_{495-503(NLVPMVATV)}是由HLA-A2提呈的T细胞主要识别肽段。以下HLA-A2/Pp65_{495-503(NLVPMVATV)}均简写为HLA-A2/NLVPMVATV。基于以上研究，在肿瘤生物治疗方面的研究上，Pp65抗原又成为研究的热点。尤其作为基因修饰的TCR，CART，TCR样抗体的优势靶点。

TCR虽然既能识别胞外抗原也能识别通过抗原加工递呈至细胞表面的胞内抗原，但TCR通常需要从T细胞克隆中分离出特异性的αβTCR基因，难度较大，重复性不高。此外，转基因TCR还有TCR错配带来的潜在安全隐患，外源TCR的两条链可能会和内源TCR亚基发生错配，组合成新的TCR。这种错配的TCR会形成未知的特异性，可能会靶向正常组织，导致严重的移植物抗宿主反应。

如果能制备出识别MHC多肽复合物的抗体分子，并表达至细胞表面，就可以将T细胞免疫和成熟的抗体技术相结合，开发出一种兼具抗体和T细胞优势的新型T细胞修饰治疗技术。

这样新型的识别MHC多肽复合物的分子与CAR相比，因具有天然T细胞受体的功能，沿用生命进化过程中获得的自我异体识别机制，即可识别肿瘤胞外抗原，也可识别通过抗原加工形成的病毒抗原，因而具有更广泛的应用，具有得天独厚的优势。

此外，以抗体为基础的靶向治疗常用的抗体是单链抗体或抗体Fab段，与它们相比，单域抗体仅含有抗体重链的一个可变区，是最小的全功能性的抗原结合片段，免疫原性较弱；更易通过血管壁，有利于疾病治疗；由于没有Fc段，不能与非靶标细胞的Fc受体结合，能更集中到达病灶部位因此容易进行基因工程操作。

发明内容