[发明专利]pCC1-Brick载体构建及在基因合成领域的应用在审

申请号：	201611205436.X	申请日：	2016-12-21
公开（公告）号：	CN108220335A	公开（公告）日：	2018-06-29
发明（设计）人：	傅邦文;夏秋;徐士军	申请（专利权）人：	南京金斯瑞生物科技有限公司
主分类号：	C12N15/85	分类号：	C12N15/85
代理公司：	南京天华专利代理有限责任公司 32218	代理人：	夏平;李晓峰
地址：	211100 江苏省南京***	国省代码：	江苏;32
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摘要：
搜索关键词：	登革热病毒基因合成载体构建合成全基因合成病毒序列毒性基因毒性问题关键元件竞争地位全基因组稳定基因载体合成质粒构建基因组等大酵母装入应用克隆体内病毒细胞基因帮助
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【说明书】：

本发明公开pCC1‑Brick载体构建及在基因合成领域的应用，该载体是采用PCR克隆的方法将一段酵母的关键元件CEN/ARS序列和LEU2序列装入pCC1质粒构建得到的。使用pCC1‑Brick载体能够解决登革热病毒的毒性问题，使得登革热病毒全基因组合成能够在细胞体内完成，而不会出现登革热病毒基因组不稳定或者根本得不到的问题。同时该载体对于其他病毒的全基因合成也证明是有效的，所以该载体合成后对我们合成毒性基因，不稳定基因，病毒序列等大基因都有很大的帮助，提升申请人在基因合成领域的竞争地位。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及构建在酵母和大肠杆菌里都可以复制的载体，通过载体的进一步改造后，这个载体可以用来合成很多不稳定的序列，比如病毒序列，这样更加方便科研工作者了解病毒的工作原理，对疫苗的研发起到了进一步的促进作用。

背景技术

申请人推出GenBrick^TM长片段大基因合成服务使用pUC57-Brick载体能够通过一步组装得到8-15kb的长片段基因，该技术大大节省了时间及成本。且所合成的序列100％准确，没有突变及错误的发生。但是随着生物学研究热点的转移，越来越多的科研客户利用这个平台合成很多病毒的基因组序列。通常这些序列是带有毒性的，会影响细胞的正常生长，从而导致常规的合成方法得不到这些基因序列。目前使用的pUC57-Brick载体对于毒性基因没有很好的耐受性，无法提高细胞对于毒性的忍受能力,导致克隆的序列有突变或者缺失。细胞不生长就无法通过一步组装得到长片段基因。

发明内容

本发明要解决的技术问题：通过构建pCC1-Brick载体，由于该载体对于毒性基因有比较好的耐受性，能够提高细胞对于毒性的忍受能力，从而使得细胞生长通过一步组装得到长片段基因。

针对以上技术问题本发明的目的在于提供一种穿梭载体pCC1-Brick。

本发明的另一目的在于提供一种穿梭载体pCC1-Brick的构建方法。

本发明的又一目的在于提供上述穿梭载体pCC1-Brick在基因合成领域的应用。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种穿梭载体pCC1-Brick，该载体是将一段酵母的关键元件CEN/ARS序列和LEU2序列装入质粒中构建得到的。

将一段酵母的关键元件CEN/ARS序列和LEU2序列装入质粒中的方法可以为PCR克隆的方法或酶切连接的方法，优选为PCR克隆的方法。所述的质粒为pCC1质粒、puc57或pacyc177等。

最优选技术方案为：该载体是采用PCR克隆的方法将一段酵母的关键元件CEN/ARS序列和LEU2序列装入pCC1质粒构建得到的。其中，酵母的关键元件CEN/ARS序列和LEU2序列如SEQ ID NO.11所示；

该穿梭载体pCC1-Brick的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示。

一种穿梭载体pCC1-Brick的构建方法，将一段酵母的关键元件CEN/ARS序列和LEU2序列装入质粒中。

最优选技术方案为：采用PCR克隆的方法将一段酵母的关键元件CEN/ARS序列和LEU2序列装入pCC1质粒。