[发明专利]一种检测多黏菌素E残留量的分析方法

说明书

本发明属于药物分析领域，涉及一种检测多黏菌素E残留量的分析方法，具体涉及一种检测多黏菌素E甲磺酸钠中多黏菌素E残留量的高效液相色谱(HPLC)分析方法。本发明提供的检测多黏菌素E甲磺酸钠样品中多黏菌素E残留量的高效液相色谱分析方法具有重复性好，灵敏度高的特点，能更好的控制CMS药物的质量，保证用药安全。

技术领域

本发明属于药物分析领域，涉及一种检测多黏菌素E残留量的分析方法，具体涉及一种检测多黏菌素E甲磺酸钠中多黏菌素E残留量的高效液相色谱(HPLC)分析方法。

背景技术

近十年革兰氏阴性耐药菌问题日益突出，由多重耐药革兰氏阴性菌所引起的致死率非常高，其中鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌耐药最严重，其临床治疗面临着巨大挑战。2010年8月以来陆续报道的产NDM-1(New Delhi Metallo-β-lactamase 1，I型新德里金属β-内酰胺酶)泛耐药肠杆菌科细菌(以下简称NDM-1细菌，俗称超级细菌)，由于其广泛耐药性导致感染治疗十分困难。国外的研究表明NDM-1细菌仅对多黏菌素E和替加环素敏感。由于替加环素对绿脓杆菌没有活性，而且对特定器官的感染疗效还没有验证。因此，多黏菌素类药物成为了治疗革兰氏阴性耐药菌感染的最后防线，其在临床上主要用于耐药(包括碳青霉烯类抗生素)绿脓杆菌、鲍曼不动杆菌引起严重感染的治疗。

临床使用的多黏菌素类药物主要有多黏菌素B、多黏菌素E和多黏菌素E甲磺酸钠(Colistimethate sodium，CMS)。硫酸多黏菌素E在我国已上市多年，并且已被中国药典收录(名称为硫酸黏菌素)，而多黏菌素E甲磺酸钠在我国没有上市，在国外作为治疗严重多重耐药性细菌感染的底线药物已经上市多年，已被欧洲药典和美国药典收录。多黏菌素B和多黏菌素E结构中均含有5个游离氨基，这些氨基的存在使得这两种药物具有非常高的抗菌活性，同时也表现出较高的毒性(主要为肾毒性和神经毒性)。对多黏菌素E的5个氨基进行磺基甲基化修饰可以得到多黏菌素E甲磺酸钠(Colistimethate sodium，CMS)。CMS在体内会逐渐转化为多黏菌素E发挥药效作用，其毒性相比于直接使用多黏菌素E显著下降。

由于多黏菌素E毒性较高，需要严格控制其在CMS中的残留量。目前欧洲药典和美国药典均使用硅钨酸法检测游离的多黏菌素E是否超标，试验中采用肉眼进行观察沉淀的多少，误差较大。经试验发现，该法的检测限为0.2％。

发明内容

本发明一方面提供一种检测多黏菌素E甲磺酸钠样品中多黏菌素E残留量的高效液相色谱分析方法，其特征在于，使用亲水填料基质且基质表面键合有弱酸阳离子交换基团的色谱柱，采用梯度洗脱的方式分离多黏菌素E甲磺酸钠和多黏菌素E，在色谱分离设备上记录样品中的多黏菌素E的峰面积以及已知浓度的多黏菌素E的峰面积，按照外标法计算出样品中多黏菌素E的残留量。

在本发明的一些实施方案中，所述亲水填料基质选自交联葡聚糖、交联琼脂糖、羟基化甲基丙烯酸聚合物或亲水硅胶。

在本发明的一些实施方案中，所述弱酸阳离子交换基团为羧甲基。

在本发明的一些实施方案中，所述亲水填料基质且基质表面键合有弱酸阳离子交换基团的色谱柱选自Hitrap CM sepharose FF柱或TSKgel CM-5PW柱。

在本发明的一些实施方案中，其中梯度洗脱使用的流动相为：流动相A为20mmol/L磷酸盐缓冲液，pH6.7；流动相B为20mmol/L磷酸盐缓冲液，1.5M NaClO₄，pH6.7。