[发明专利]一种检测硫氰酸钠的化学发光酶联免疫分析法

说明书

本发明公开了一种硫氰酸钠的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的试剂；其特征在于，所述酶标板的各孔包被有包被抗原即硫氰酸钠类母核与载体蛋白的偶联物；所述试剂包括：硫氰酸钠类单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体、硫氰酸钠类系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液；本发明的化学发光酶联免疫检测试剂盒具有高灵敏度、简便快速、准确度高、检测药物种类多的特点，与传统的比色ELISA法比较，操作时间大幅度减少；该方法可直接用于检测乳制品中的硫氰酸钠含量。

技术领域

本发明涉及一种酶联免疫检测试剂盒，尤其涉及一种硫氰酸钠的化学发光酶联免疫检测试剂盒。

背景技术

硫氰酸钠（NaSCN）是生乳中天然存在的一种活性抗菌体系，其乳过氧化

物酶体系（LPS)可以抑菌保鲜。1991年，WHO和FAO的食品法典委员会公布的CAC/GL 13-1991《乳过氧化物酶体系用于原料乳的保鲜指南》中，硫氰酸钠作为LPS的活化剂被允许添加到牛奶中；我国也于随后颁布标准，允许将其添加到无冷链运输体系中用于原料乳保鲜，添加量为15mg/L。

但硫氰酸钠属有毒有害物质，其主要毒性作用为以抑制细胞色素氧化酶活性为主的急性毒性与以抑制碘转运及甲状腺素合成的慢性毒性，尤其对胎儿和婴儿的脑部与神经系统发育存在较大的危害。随着社会对食品安全重视度提高及原奶冷链运输的完善，国家废除了之前的标准并于2008年12月公布《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单（第一批）》，规定乳及乳制品中硫氰酸钠属违法添加物质。目前，我国尚未制定检测牛奶中硫氰酸钠的标准及限值。Ft%HWGE

目前，检测硫氰酸钠的方法主要有：高效液相色谱法(HPLC)、色/质联用分析法(LC-MS)、液/质联用分析法(LC-MS/MS)。薄层色谱法的缺陷是：操作过程复杂，时间长；操作人员需要经过专业培训；影响分析的干扰因素较多，结果重复性差。放射免疫法，高效液相色谱法、色/质连用分析法、液/质联用分析法这些理化方法的缺陷是仪器设备昂贵，样品前处理复杂，费时，费力，不易普及，检测费用高，特别是放射免疫法还需要配备放射源，有一定危险性。鉴于此，建立一种有效、快速、简单、灵敏的检测乳制品中硫氰酸钠含量的方法具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种硫氰酸钠的化学发光酶联免疫检测试剂盒。该试剂盒具有检测灵敏度高、应用灵活、方便的特点。

本发明所述硫氰酸钠的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的硫氰酸钠系列标准溶液、酶标羊抗兔抗体、硫氰酸钠抗体、发光溶液、洗涤溶液、包被溶液及封闭溶液；其特征在于：

所述酶标板的各孔包被有以硫氰酸钠与卵清蛋白偶合制成的包被抗原，其中包被抗原浓度优选10μg/mL。

所述卵清蛋白的分子量范围优选6.7KDa~6.8KDa。

所述硫氰酸钠系列标准溶液分别是0mg/kg，0.1mg/kg，0.3mg/kg，0.9mg/kg，2.7mg/kg和8.1mg/kg所述酶标羊抗兔抗体为辣根过氧化酶-羊抗兔IgG原液，其工作浓度优选为1:1000。

所述硫氰酸钠抗体是由硫氰酸钠与分子量范围是6.7KDa~6.8KDa的牛血清蛋白偶合制成的人工免疫原免疫动物制得的多克隆抗体，其工作浓度优选为1:1000。

所述发光液是0.01M鲁米诺与0.001M对甲苯酚的三(羟甲基)氨基甲烷溶液(pH＝8.8)和3/10000(体积比)H₂O₂的混合液。所述鲁米诺为发光底物，对甲苯酚为发光增强剂。

所述洗涤溶液是含有体积分数0.05％吐温-20的pH7.5、0.1mol/L磷酸盐缓冲液。