[发明专利]一种纳米技术在羊胚胎提取中的应用以及羊胚胎素的质量标准

说明书

技术领域

本发明涉及纳米技术领域，具体为一种纳米技术在羊胚胎提取中的应用以及羊胚胎素的质量标准。

背景技术

自1912年，瑞士科学家卡尔教授首次发现羊胚胎细胞中有一种能使细胞恢复活力的物质(称之为羊胚胎素)以来。羊胚胎中含有活化细胞、增强生命系统免疫功能、恢复人体精力的多种物质，这些物质对人类抗衰老、治疗和预防疾病得到了应用。随着人类对羊胚胎素用研究深入，羊胚胎素的提取与纯化技术，对羊胚胎素在人类应用中起决定性作用。具有高生物活性小分子羊胚胎素能快速被人体吸收利用，且安全、效果明显，它通过增强人体免疫功能，调节人体内分泌，加速细胞的分裂，修复受细胞，活化衰老细胞，使人体各细胞及组织达到年轻状态，人体各机能均被激活，达到真正意义上的延缓衰老，治疗和预防疾病。羊胚胎素包括细胞中含有蛋白质、核酸、糖类、磷脂类、维生素、酶等。按常规方法提取的羊胚胎素中的大分子物质多，成分复杂，过敏性高，活性低、生物利用率低。

羊胚胎素的生物活性高低和分子的大小能决定羊胚胎素是否可以达到上述效果。目前的提取方法主要以粉碎、生化提取、离心、微滤，整个生产过程中受热量和化学物质的影响，特别是细胞破碎后没有对生物活性物质保护，生物活性受到破坏较大，因此提取物中羊胚胎素的活性较低，其次在纯化时采用微滤，成分复杂，不易吸收，过敏源多，再提取出来的羊胚胎素无质量标准，不能保证其质量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种纳米技术在羊胚胎提取中的应用以及羊胚胎素的质量标准，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

1.一种从羊胚胎中制备羊胚胎提取液的方法，从羊胚胎的选取及处理开始，经过组织破碎、细胞反复冻融、离心去杂、微滤，获得羊胚胎提取液，包括下述步骤：

(1)羊胚胎选取与处理：其羊胚胎为孕期6-8周，脱母体后浸泡在生理盐水中，30min内置-20℃储藏；

(2)组织破碎：去除羊胚胎肠胃杂质，碎成碎片，绞肉机2次后用4-6℃生理盐水制成肉浆，再用胶体磨研磨4次；

(3)细胞反复冻融：在-35±2℃和0℃反复冻融三次，每35±2℃时间冻融时间为12小时；

(4)离心去杂：采用冷冻离心机，确保离心室温度在-8—-10℃；

(5)微滤：离心上清液经滤纸过滤后，再经0.8um、0.2um过滤，得羊胚胎提取液。

作为本发明更进一步的技术方案，步骤(2)中所述生理盐水与羊胚胎重量比例为15：1。

2.一种从羊胚胎提取液中分离纯化得到羊胚胎素溶液的制备方法，通过不同纳米递度过滤，获得羊胚胎素溶液，包括下述步骤：

(1)纳滤：经过微滤后的羊胚胎提取液，在无菌条件下采用不同纳米递度过滤，去掉分子量大于6000道尔顿的物质(高分子物质、细菌、病毒等)和分子量小于100道尔顿物质(无机盐类等)；

(2)纳滤后的处理：纳滤后的溶液充氮后密封保存，确保储藏期因氧化导致生物活性降低，同时回收100道尔顿以下的液体循环利用，减少排放达到环保。

作为本发明更进一步的技术方案，在无菌条件下指的是B级洁净区内。

作为本发明更进一步的技术方案，不同纳米递度为10—100nm。

3.一种羊胚胎素溶液的质量标准，具体为：

性状：本品为无色或微黄色液体。

鉴别：取本品，加40％氢氧化钠溶液0.5ml，摇匀，再加1％硫酸铜溶液1ml,溶液显紫红色。

PH值：6.0～7.5；

蛋白质：取本品2ml，加20％磺基水杨酸溶液1ml，混匀，不得发生混浊或沉淀；

多肽含量：不得低于6mg/ml；

高分子物质：不得高于5.0％；

生物活性：不得低于30.0％；

贮藏：充氮密闭，-4℃以下保存；

有效期：24个月。

作为本发明更进一步的技术方案，多肽含量的测定方法为福林酚测定法。

作为本发明更进一步的技术方案，高分子物质的测定方法为高效液相色谱法。

作为本发明更进一步的技术方案，生物活性的测定方法为T细胞活性测定法-脱E受体法。

与现有技术相比，本发明提供了一种羊胚胎提取和纯化方法，解决了羊胚胎素中高分子物质多、成分杂、过敏源多、生物活性低的原因。同时本发明建立了羊胚胎素溶液质量标准，解决了羊胚胎提取后无标准检测的问题。