[发明专利]一种检测烟气总粒相物对细胞炎症效应因子影响方法

说明书

本发明公开一种检测烟气总粒相物对细胞炎症效应因子影响方法，包括以下步骤：(1)受试物的前处理；(2)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的制备；(3)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的细胞浓度的计算；(4)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的细胞接种；(5)受试物的分组；(6)受试物检测剂量的设定；(7)受试物培养品的制备；(8)受试物的孵育；(9)受试物孵育品的收集；(10)标准溶液配制；(11)添加待测样；(12)添加抗体；(13)添加结合液；(14)显色；(15)测量吸光值；(16)细胞因子分泌量测定。本发明的方法能够准确有效的检测卷烟烟气总粒相物对细胞炎症效应因子分泌影响。

技术领域

本发明属于烟草制品生物学效应评价技术领域，特别涉及一种检测烟气总粒相物对细胞炎症效应因子影响方法。

背景技术

随着人们对健康的关注越来越高，对烟草产品提出了更高的要求，不但要有较好的口感，而且要尽可能的减少人体的不良感受。卷烟产品研发人员在烟油产品配方设计初期将不同组份按照不同比例组合调配，形成具有不同风格的初选配方，再结合化学评价和感官评价对配方进行不断筛选调整形成最终的产品配方。然而初选配方数量众多，全部进行感官评价耗时耗力，且感官评价侧重于对产品的风格口感进行筛选，如何利用生物学测试指标对产品初选配方进筛选，以获得降低人体不良感受的产品配方，目前尚属探索阶段，无统一的标准方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测烟气总粒相物对细胞炎症效应因子影响方法，为电子烟制品的安全性评估提供参考。

一种检测烟气总粒相物对细胞炎症效应因子影响方法，包括以下步骤：

(1)受试物的前处理；

(2)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的制备；

(3)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的细胞浓度的计算；

(4)人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的细胞接种；

(5)受试物的分组；

(6)受试物检测剂量的设定；

(7)受试物培养品的制备；

(8)受试物的孵育；

(9)受试物孵育品的收集；

(10)标准溶液配制；

(11)添加待测样；

(12)添加抗体；

(13)添加结合液；

(14)显色；

(15)测量吸光值；

(16)细胞因子分泌量测定。

本发明优选的实施方案中，上述的方法，包括以下具体步骤：

(1)受试物的前处理：参照中华人民共和国国家标准GB/T 19609-2004《卷烟用常规分析用吸烟机测定总粒相物和焦油》制备卷烟烟气总粒相物样品，样品浓度为10mg/mL；

(2)人肺成纤维细胞HPF单细胞悬浮液的制备：人肺成纤维细胞复苏后，接种到细胞培养瓶中，置于37℃、5vt％CO₂培养箱中培养，倒置显微镜观察培养细胞的汇合和形态情况，待细胞长至90％的汇合率时，移除培养瓶中的培养基，用磷酸缓冲液洗两次，加入适量0.25％的胰蛋白酶溶液，其中胰蛋白酶/磷酸盐缓冲液的浓度单位为质量：体积；单层孵育约1-2min，用成纤维成纤维细胞培养基悬起，形成单细胞悬浮液；

(3)人肺成纤维细胞HPF单细胞悬浮液的细胞浓度的计算：用血球计数板计数法对步骤(2)得到人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的细胞浓度进行计算，计算出每毫升人肺成纤维细胞单细胞悬浮液的活细胞数；