[发明专利]诱导脐带血单个核细胞分化为粒系细胞的方法

说明书

本发明公开了一种诱导脐带血单个核细胞分化为粒系细胞的方法、试剂盒及系统。所述诱导脐带血单个核细胞分化为粒系细胞的方法包括：利用第一培养基对所述脐带血单个核细胞进行扩增培养，以便得到扩增后的造血干细胞；以及利用第二培养基对所述扩增后的造血干细胞进行诱导培养，以便得到所述粒系细胞，所述第一培养基为spemspan培养基，所述第二培养基为含有第一添加物的X‑VIVO^TM15培养基，且所述第一添加物包括重组人血小板生成素、重组人干细胞因子以及重组人粒细胞集落刺激因子。本发明的方法能够获得大量粒系细胞，诱导分化效率较高。

技术领域

本发明涉及生物工程领域。具体地，本发明涉及诱导脐带血单个核细胞分化为粒系细胞的方法。更具体地，本发明涉及诱导脐带血单个核细胞分化为粒系细胞的方法、试剂盒及系统。

背景技术

粒系细胞是血液非特异性免疫系统的重要组成部分，特别是中性粒细胞，在非特异性免疫应答中执行重要的生理功能，当炎症发生时，具有趋化作用的中性粒细胞，到达炎症部位，吞噬微生物病原体，由于中性粒细胞内含有大量溶酶体酶，能将吞噬入细胞内的细菌和组织碎片分解、杀灭。化学药物、电离辐射(放化疗)、严重感染等原因会导致骨髓损伤和粒系细胞减少。粒系细胞缺乏常导致头晕、乏力，此外还可出现严重感染症状，感染部位以肺、尿路、皮肤等多见，易发生脓毒血症或败血症，死亡率可达25％。中性粒细胞减少症是由于外周血中性粒细胞数量减少而产生的综合征，是肿瘤治疗中最常见的并发症，在接受化疗的实体肿瘤病人中发生率为10％-20％，死亡率达到9.8％。造血干细胞诱导分化粒细胞为临床应用提供新的途径。

然而，目前粒系细胞的扩增及诱导体系还存在诱导分化效率低、细胞数量少等问题，仍有待研究。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出了一种诱导脐带血单个核细胞分化为粒系细胞的方法、试剂盒及系统。利用该方法、试剂盒和系统能够获得大量粒系细胞，诱导分化效率较高。

为此，在本发明的一个方面，本发明提出了一种诱导脐带血单个核细胞分化为粒系细胞的方法。根据本发明的实施例，所述方法包括：利用第一培养基对所述脐带血单个核细胞进行扩增培养，以便得到扩增后的造血干细胞；以及利用第二培养基对所述扩增后的造血干细胞进行诱导培养，以便得到所述粒系细胞，所述第一培养基为spemspan培养基，所述第二培养基为含有第一添加物的X-VIVO^TM15培养基，且所述第一添加物包括重组人血小板生成素、重组人干细胞因子以及重组人粒细胞集落刺激因子。

发明人惊奇地发现，预先将脐带血单个核细胞进行扩增培养，以获得大量的造血干细胞，再对其进行诱导培养，以获得大量的粒系细胞。采用上述两阶段培养的诱导模式获得的粒系细胞量明显高于直接将脐带血单个核细胞进行诱导培养。进一步地，发明人发现，第一培养基成分及第二培养基成分显著影响诱导分化效率，若第一培养基成分及第二培养基成分不适于脐带血单个核细胞扩增为造血干细胞及其分化为粒系细胞，会使得粒系细胞诱导分化效率较低。例如，若第一培养基成分不适，可能容易使得脐带血单个核细胞扩增为造血干细胞的数量减少，从而导致粒系细胞得率偏低；若第二培养基成分不适，可能容易使得造血干细胞定向分化为粒系细胞的数量减少，也会导致粒系细胞得率偏低。为此，发明人经过深入研究得到最优第一培养基和第二培养基成分，由此，使得粒系细胞诱导分化效率较高，从而获得大量粒系细胞。

根据本发明的实施例，上述诱导脐带血单个核细胞分化为粒系细胞的方法还可以进一步具有下列附加技术特征：

根据本发明的实施例，所述spemspan培养基含有第二添加物，所述第二添加物包括：重组人血小板生成素、重组人干细胞因子、重组人白细胞介素-3以及重组人白细胞介素-6。由此，根据本发明实施例的方法能够获得大量造血干细胞，诱导分化效率较高。