[发明专利]多溴联苯醚和重金属污染下苔藓生理生化的测定方法

权利要求书

1.多溴联苯醚和重金属污染下苔藓生理生化的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)、选择试剂：重金属环境采用Pb(NO₃)₂溶液，多溴联苯醚环境选择BDE-209溶液和BDE-47溶液；

(2)、对于苔藓的选取、培养：

a、选取苔藓绿色的茎叶部分，用自来水冲洗1-3次，再蒸馏水清洗2-3次，最后用蒸馏水培养处理1-3天；

b、从蒸馏水取出苔藓，用滤纸吸干样品表面水分，置于玻璃材质的培养瓶中；

(3)、对苔藓进行暴毒：对苔藓进行分组，用Pb(NO₃)₂溶液、BDE-209溶液和BDE-47溶液分别对不同组苔藓进行暴毒；

(4)、将暴毒后的苔藓置于人工气候箱中培养，保持人工气候箱以25℃的环境，且光周期为11h-13h；

(5)、将培养好的苔藓从培养瓶中取出，用滤纸吸干，置于-80℃冰箱中保存；

(6)、每组苔藓重复以上处理3次，对每组苔藓中的叶绿素(Chl)、丙二醛(MDA)、脯氨酸(Pro)、超氧自由基(·O₂^-)、过氧化氢(H₂O₂)、超氧化歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)进行测定。

2.根据权利要求1所述的多溴联苯醚和重金属污染下苔藓生理生化的测定方法，其特征在于，所述的步骤(6)中，每组苔藓中的叶绿素(Chl)测定包含以下步骤：

A1、每份样品称取苔藓鲜重0.2g放于冰研钵中剪碎，后用3mL浓度为80％的预冷丙酮、少量石英砂和CaCO₃避光快速研磨成匀浆，匀浆迅速转入离心管，转入过程中用7mL浓度为80％预冷丙酮分2次净洗研钵一并转入离心管；

A2、离心机置于4℃、4000r·min^-1条件下离心10min,提取上清液定容到10mL，以80％浓度的丙酮为空白、分光光度计置于663nm、645nm条件下分别测定吸光度；

A3、计算公式：

C_a＝12.7*A₆₆₃-2.59*A₆₄₅，

C_b＝22.9*A₆₄₅-4.67*A₆₆₃，

C_a+b＝20.3*A₆₄₅-8.04*A₆₆₃，

叶绿素含量＝C*V/A*1000，

式中：叶绿素含量单位为mg·g^-1或mg·dm^-2；C—叶绿素浓度，单位为mg·L^-1或mg·dm^-2；V—提取液的总体积，单位为mL；A—取样鲜重，单位为g或取样面积，单位为dm^-2。