[发明专利]一种桃叶卫矛花粉超低温保存和再生的生产方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种桃叶卫矛花粉超低温保存和再生的生产方法，属于一种园林生产、种质资源保护领域。

背景技术

桃叶卫矛，又名白杜、丝绵木，是卫矛科卫矛属的一种小乔木，是我国常见的观赏类庭园树种之一，其叶形秀丽，植株繁茂，包被有红色假种皮的果实可长期宿存于枝头，到了冬季，白雪红果相映，十分美丽，为冬季的北方园林增添了不少色彩。桃叶卫矛在耐寒、抗旱、抗风等方面具有良好的适应性；桃叶卫矛果实总皂苷对人肝癌细胞系-SMMC、人宫颈癌细胞系-HeLa和乳腺癌细胞系-MCF7有明显的抑制生长作用；桃叶卫矛的种子含丰富的脂肪类物质，含油率高达40％以上，可用做工业用油；木材细腻坚韧，可用于雕刻、制帆杆或滑车等；种子及根药用，可用于治疗膝关节痛、漆疮等疾病。由此可见，桃叶卫矛是一种集工业、药用、观赏应用于一体的植物，具有较高的推广价值。若采用传统的种植保存，极易使其受到病菌或虫害的影响，进而造成极大的人力财力的损失,成熟的花粉含有植物的全部遗传品质信息，花粉超低温保存操作简单，是进行种质资源保存的一条新途径，是目前唯一可行的长期而稳定地保存种质资源的方法。

植物种质资源超低温保存是指将植物细胞、组织或器官在液氮(-196℃)的超低温条件下进行保存。在如此低的温度下，植物材料中参与新陈代谢的各种生物酶的活性受到极大抑制，生物体新陈代谢基本停止，处于“假死”状态，利用该方法可以实现植物种质资源的永久保存。目前成功进行超低温保存的材料类型有种子、休眠芽、茎尖分生组织、花粉、合子胚(胚轴)、体细胞胚、悬浮细胞、愈伤组织、原生质体等。其中花粉超低温保存操作简单，可保持特定的基因型。

将超低温保存技术应用于花粉保存，其优点：操作简单易行、占用空间小、安全稳定保存成本低可以大大延长花粉的保存时间，使花粉的贮运和交换成为可能，同时还能很好服务于育种工作，提高育种效率经过低温保存的花粉能保持其遗传完整性和稳定性低温条件下还可以避免病虫害的引入，为地区间、国际间的种质交换提供方便。

一种桃叶卫矛花粉超低温保存和再生的生产方法，目前还未见报道。因此，发明桃叶卫矛花粉超低温保存和再生的生产方法是非常必要的。

发明内容

本发明的目的是通过以下技术方案来实现：

将不同时间采集的桃叶卫矛新鲜花粉放入1.8ml的冻存管中，花粉的体积不超过冻存管容量的2/3，然后将冷冻管放入盛有硅胶干燥剂的干燥皿内干燥不同的时间后获得不同含水量的花粉，干燥皿规格为V＝410mm×410mm×310mm、Φ＝300mm；将装有花粉的冻存管投入﹣196℃液氮罐中保存；取出冻存管进行不同化冻处理；化冻后将花粉在不同浓度的蔗糖和硼酸培养液中测定萌发率。

所述不同采集时间，1d中不同时间所采集的花粉萌发率不同，我们分别采集了6:00、8:00、10:00、12:00、14:00、16:00、18:00的桃叶卫矛花粉。

所述干燥不同的时间分别为干燥2h、4h、6h、8h、10h、12h。

所述不同含水量，为桃叶卫矛花粉干燥的时间不同，得到的含水量。

所述不同化冻方式，分别为三种：(1)室温化冻30min；(2)40℃水浴化冻2min；(3)自来水冲洗8min。

所述不同蔗糖和硼酸浓度，以桃叶卫矛花粉为材料，去离子水作为溶剂，加入不同浓度的蔗糖和硼酸，采用二因素完全随机的方法，共设计了16种不同培养基。分别为：蔗糖50g/L+硼酸0mg/L；蔗糖50g/L+硼酸100mg/L；蔗糖50g/L+硼酸150mg/L；蔗糖50g/L+硼酸200mg/L；蔗糖100g/L+硼酸0mg/L；蔗糖100g/L+硼酸100mg/L；蔗糖100g/L+硼酸150mg/L；蔗糖100g/L+硼酸200mg/L；蔗糖150g/L+硼酸0mg/L；蔗糖150g/L+硼酸100mg/L；蔗糖150g/L+硼酸150mg/L；蔗糖150g/L+硼酸200mg/L；蔗糖200g/L+硼酸0mg/L；蔗糖200g/L+硼酸100mg/L；蔗糖200g/L+硼酸150mg/L；蔗糖200g/L+硼酸200mg/L。

通过对以上技术方案进行实验找出最佳的一种桃叶卫矛花粉超低温保存和再生的生产方法，用于权利要求。

具体实施方式：

以下对本发明结合具体的实例作进一步的详细说明，并介绍本发明的相关研究结果。

1.以东北林业大学校内的桃叶卫矛花粉为例对本发明作进一步的详细说明。