[发明专利]一种抗肾小球基底膜抗体IgG化学发光免疫测定试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种抗肾小球基底膜抗体IgG化学发光免疫测定试剂盒，所述试剂盒包括：抗肾小球基底膜抗体IgG单克隆抗体包被的-纳米磁微球、化学发光标记物、化学发光底物液、抗肾小球基底膜抗体IgG定标品。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗肾小球基底膜抗体IgG单克隆抗体包被的固相载体为磁微粒。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗肾小球基底膜抗体IgG单克隆抗体包被的固相载体为羧基化的粒径为0.05-1um磁微粒。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物为吖啶酯、吖啶酯磺酰胺、吖啶酯甲苯磺酰胺、吖啶酯对甲基磺酰胺、吖啶酯三氟甲基磺酰胺。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物优选吖啶酯。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物液包括化学发光激发液、化学发光预激发液。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光预激发液为质量分数0.005% ~ 0.5%的双氧水(H₂O₂)溶液，激发液为0.005mol/L ~ 0.025mol/L的氢氧化钠(NaOH)溶液。

8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗肾小球基底膜抗体IgG定标品为用标准品缓冲液将抗肾小球基底膜抗体IgG配制成浓度为0 AU/mL、32.5 AU/mL、65 AU/mL、130 AU/mL、260 AU/mL、520 AU/mL，4 ℃保存备用。

9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的制备方法，其特征在于包括抗肾小球基底膜抗体IgG单克隆抗体包被的磁微粒的制备、抗肾小球基底膜抗体IgG衍生物标记的吖啶酯的制备、化学发光底物液的制备、抗肾小球基底膜抗体IgG定标品的制备。

10.根据权利要求1和权利要求9所述试剂盒的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）抗肾小球基底膜抗体IgG单克隆抗体包被的磁微粒的制备：

取羧基化的纳米磁珠悬浮液，磁分离去上清， MES缓冲液重悬，加入EDC水溶液，活化磁珠表面羧基，加入抗肾小球基底膜抗体IgG单克隆抗体，室温下混悬2-10 h，磁分离，去除上清， Tris缓冲液重悬，得到抗肾小球基底膜抗体IgG单克隆抗体包被的磁微粒；可选的，羧基化纳米磁珠直径为0.1μm ~ 2.0μm；

MES缓冲液浓度为10mM ~ 100mM，pH 5.5 ~ 8.5；

2）抗肾小球基底膜抗体IgG衍生物标记的吖啶酯的制备：

取抗肾小球基底膜抗体IgG衍生物，加入碳酸盐缓冲液，混匀，然后加入吖啶酯混匀，室温下避光反应，1-2 h后取出，离心脱盐柱脱盐处理，脱盐过程中首先分别用纯净水及TBS缓冲液进行处理，最后加入得到的抗肾小球基底膜抗体IgG衍生物标记的吖啶酯溶液，收集离心管中的液体至保存管得到抗肾小球基底膜抗体IgG衍生物标记的吖啶酯；

3）抗肾小球基底膜抗体IgG定标品的制备：

用标准品缓冲液将抗肾小球基底膜抗体IgG配置成浓度为0 AU/mL、32.5 AU/mL、65 AU/mL、130 AU/mL、260 AU/mL、520 AU/mL，分装冻干，4 ℃保存备用；

4）化学发光预激发液的制备：

量取1.0升纯化水，依次加入0.5 ~100uL质量分数为20%的双氧水(H₂O₂)、0.5 ~ 5克防腐剂、0.5 ~ 5克表面活性剂，摇匀后避光存放；可选的，防腐剂为商品化叠氮化钠、PC300，表面活性剂为吐温20、吐温80、Triton X100、Triton 405；

5）化学发光激发液的制备：

量取1.0升纯化水，依次加入0.2 ~ 1克氢氧化钠、0.5 ~ 5克防腐剂、0.5 ~ 5克表面活性剂，摇匀后避光存放；

可选的，防腐剂为商品化叠氮化钠、PC300，表面活性剂为吐温20、吐温80、Triton X100、Triton 405。