[发明专利]用于检测去势抵抗性前列腺癌的ELISA试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫测定法技术领域，尤其涉及用于检测去势抵抗性前列腺癌的ELISA试剂盒及检测方法。

背景技术

前列腺癌是男性泌尿系统最常见的恶性肿瘤，在欧美国家较为常见，是男性最常见的恶性肿瘤，占所有恶性肿瘤的第二位。我国是传统的前列腺癌发病率较低的国家，但是近年来随着人民生活水平的提高，环境的改变，以及疾病筛查普及率的提高，我国的前列腺癌发病率正在逐年上升。前列腺癌已成为威胁我国男性健康的一种重要疾病，正在受到越来越多的关注和重视。

前列腺癌最重要的治疗方式之一就是去势疗法，包括药物抗雄激素治疗以及手术去势治疗，以阻止雄激素结合到雄激素受体上的方式来抑制肿瘤的生长。在前列腺癌早期，去势治疗有较好的效果，但是经过一段时间的治疗之后，前列腺癌逐渐转变为雄激素非依赖性的，对去势治疗不再敏感，病情再度恶化，即去势抵抗性前列腺癌(CRPC)阶段。去势抵抗性前列腺癌的发病机制目前尚不清楚，也没有较好的治疗方法，是前列腺癌基础与临床领域的难题。

目前对于去势抵抗性前列腺癌的诊断并没有很好的方法，主要是依靠监测前列腺特异性抗原和睾酮的变化，以及根据临床表现来综合判断，缺乏较好的特异性，不能准确地判断出去势抵抗性前列腺癌。及早地发现去势抵抗性前列腺癌，对后期治疗策略的制定和对前列腺癌更加深入地从分子水平认识，有着非常重要的意义。

发明内容

本发明就是为了解决现有技术中检测去势抵抗性前列腺癌的产品或方法特异性差、准确性不高的问题，所提出的一种用于检测去势抵抗性前列腺癌的ELISA试剂盒及检测方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

用于检测去势抵抗性前列腺癌的ELISA试剂盒，包括分别包被ACTG1抗体、β-actin抗体和FGγ抗体的ELISA酶标板；标准品；样本稀释液；生物素标记的ACTG1抗体、β-actin抗体和FGγ抗体；亲和素标记的辣根过氧化物酶；洗涤液；底物溶液；反应终止液和覆膜。

进一步的，所述样本稀释液制备过程如下：取100mLPBS溶液，向其加入2g BSA，至最终质量浓度为2％，充分混匀，避免起泡。

进一步的，所述洗涤液的制备过程如下：将0.5mL 0.05％Tween-20加入到1000mL PBS缓冲液中。

进一步的，所述分别包被ACTG1抗体、β-actin抗体和FGγ抗体的ELISA酶标板中的包被抗体浓度为1-100μg/mL，所述生物素标记的ACTG1抗体、β-actin抗体和FGγ抗体的浓度为0-100μg/mL，所述亲和素标记的辣根过氧化物酶浓度0.0001-0.0005mg/mL，所述样品为前列腺癌患者的血清；所述底物溶液为TMB(四甲基联苯胺)的质量浓度为0.01％；所述反应终止液为2mol/L H₂SO₄。

进一步的，所述分别包被ACTG1抗体、β-actin抗体和FGγ抗体的ELISA酶标板中的包被抗体浓度优选为10μg/mL。

进一步的，所述生物素标记的ACTG1抗体、β-actin抗体和FGγ抗体的浓度优选10μg/mL。

用于检测去势抵抗性前列腺癌的ELISA试剂盒的检测方法，包括以下步骤：

步骤一：采集前列腺癌患者全血样品，2000rpm 20min离心，取上清液，收集血液的试管为一次性的无热原、无内毒素的试管；

步骤二：将各试剂平衡至室温，待测样品孔每孔分别加样品血清100μL，每个样品平行检测2孔，同时设空白孔、标准品对照各两孔，取标准品β-actin 10ng、ACTG1 2000pg、FGγ1000ng各100μL分别加入反应孔中，空白对照孔仅加入100μL样品稀释液；酶标板加覆膜，37℃孵育90min；

步骤三：弃去孔内液体，甩干；三个检测板每孔分别加入生物素标记的ACTG1抗体、β-actin抗体和FGγ抗体各100μL，酶标板加覆膜，37℃温育1h；

步骤四：弃去孔内液体，甩干，洗涤酶标板1-5次，每次用洗涤液浸泡1-2min，再甩干；

步骤五：每孔加入亲和素标记的辣根过氧化物酶100μL，酶标板加覆膜，37℃温育30min；

步骤六：弃去孔内液体，甩干，洗涤酶标板3-7次，每次用洗涤液浸泡1-2min，再甩干；

步骤七：每孔加入底物溶液(TMB)90μL，酶标板加覆膜，37℃避光孵育15-30min；

步骤八：每孔加入反应终止液50μL，终止反应，此时蓝色变为黄色；