[发明专利]一种活性污泥包埋凝胶中生物量的测定方法

权利要求书

1.一种活性污泥包埋凝胶中生物量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)、样品前处理及细菌全蛋白提取：分别取一定体积具有稳定处理效果的活性污泥，按MLVSS计，以mg计：10、30、50、70、90、110、130、150， 分别用50mlPBS冲洗后倒入第一三角烧杯中；然后取20ml体积活性污泥包埋颗粒样品，经碾碎后用50mlPBS冲洗后倒入第二三角烧杯中；在第一三角烧杯和第二三角烧杯中分别加入1ml裂解液，通过超声波分别提取活性污泥和包埋颗粒样品中的蛋白样品；通过超声波分别提取活性污泥和包埋颗粒样品中的蛋白样品的工作条件为：11kHz，10s×84个循环，间隔1min，冰浴，振荡条件为：5×30s，间隔1min，冰浴，将处理后的悬液4℃、14000rpm离心30min，

步骤(2)、蛋白质浓度测定：采用BCA试剂盒测定步骤(1)中所制备的细菌蛋白浓度，所述试剂盒包括BCA试剂A液、B液、5mg/mlBSA溶液，将A液和B液按照50:1混合，制备BCA工作液；完全溶解BSA溶液20ul稀释至100ul，使其终浓度1.0mg/ml，将稀释后的BSA溶液按0、0.5、2.5、5.0、10、15、20ul体积加到96孔酶标板中，将未稀释BSA溶液按6、8ul体积加到96孔酶标板中；分别取20ul步骤(1)中待测蛋白样品加入到96孔酶标板中；向酶标板中各加入200ulBCA工作液，混匀，且37℃孵育30min；测定562nm处的吸光值，并记录读数，以A₅₆₂为纵坐标，BSA溶液含量为横坐标，绘制标准曲线，分别计算活性污泥及包埋颗粒样品中的蛋白浓度；

步骤(3)、数据处理：以步骤(2)中测得的活性污泥中蛋白浓度为横坐标，以MLVSS为纵坐标拟合后得到样品中生物量的标准曲线，最后由步骤(2)中测得的包埋颗粒样品中蛋白浓度代入生物量标准曲线得到包埋样品的生物量。