[发明专利]专门用于快速大量提取口腔上皮细胞DNA的方法

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学实验领域，尤其是一种专门用于快速大量提取口腔上皮细胞DNA的方法。

背景技术

基因检测是通过提取被测者的血液、其他液体或者组织细胞对DNA进行检测的技术。目前，随着生物技术的发展，基因检测已经逐步成为继传统体检以外的新兴的疾病健康检测手段。

脱氧核糖核酸(DNA)提取是基因检测的一个基本步骤，也是整个基因检测的基础，核酸的浓度和纯度的质量直接关系到后续的检测能否成功。相较于传统体检，基因检测可以直接提取被测者的口腔上皮细胞的DNA，具有无痛无创口的优势。因此，口腔上皮细胞DNA的提取，成为基因检测的主流DNA提取方法。

目前，市场上，用于口腔上皮细胞DNA提取的方法主要分为离心柱法和磁珠法。离心柱法的主要原理是：离心柱中的膜可以对细胞破碎后的DNA的进行特异性的吸附，其余的细胞裂解物由于不能吸附在离心柱上，而被巨大的离心力甩出离心柱，最后对膜进行洗脱而得到所需的DNA。离心柱法的主要缺陷是特异性吸附柱对DNA的吸附效率不高，从而导致得到的DNA的量相对较少。磁珠法的主要原理大体与柱提法相似，即通过可对DNA特细异性吸附的磁珠，使用清洗液对其它的细胞裂解物进行去除。最后由于磁珠具有磁性，可以吸附在磁力架上，所以特异性吸附的DNA不会被清洗，从而达到分离纯化DNA的目的。由于特异性吸附DNA的磁珠不可重复使用，而且其造价较贵，所以导致磁珠法成本较高。而且这2种方法的操作步骤较为繁琐，需要花费较长的时间。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种提取口腔上皮细胞基因组的DNA方法，能够稳定高效的提取口腔上皮细胞基因组DNA。

本发明实现目的的技术方案如下：

一种专门用于快速大量提取口腔上皮细胞DNA的方法，步骤如下：

⑴收集样品细胞

用2个口腔拭子分别刮取口腔左右两侧的口腔上皮细胞，并把拭子头转移到2个含1ml去离子水的1.5ml的离心管中；震动离心管，使细胞从拭子上尽可能多的脱落，然后将2个含有口腔上皮细胞的1.5ml管离心，转速：800×g，时间：2分钟；吸弃上清液，每个EP管加入500μl的无菌水，将其中一个EP管的细胞转移到另一个EP管中，离心，转速：800×g，时间：2分钟；

⑵裂解细胞

吸弃上清液，向每管中加入500μl的溶液A，溶液A含9.5mmol/L的Tris-Cl，2mmol/L的EDTA，1％的SDS，3％的Triton-100，pH＝8.5，加后加入50μl浓度为1mg/ml的蛋白酶K溶液，涡旋振荡10秒钟，放入55℃水浴内15分钟；每5分钟振荡一次；

⑶去除蛋白

短暂离心，将管壁上的残留液体离至管底；加入200μl的醋酸钠-冰醋酸溶液，剧烈振荡20秒钟，管中出现白色絮状物；12000×g离心3分钟，使白色物质沉淀到离心管底部；

⑷沉淀DNA

吸取400-500μl的上清液到新的EP管中，加入800μl溶液B，溶液B组成为无水乙醇：异丙醇＝1:3，振荡10秒钟，使上清液与异丙醇充分混合；12000×g离心3分钟；

⑸乙醇洗涤

吸弃上清，加入800μl的75％乙醇，振荡5秒钟，12000×g离心2分钟；吸弃上清，重复上述步骤一次；

⑹溶解DNA

小心吸弃上清，室温下敞口干燥10分钟；将DNA溶解到100μl的无菌水中；

⑺保存DNA

将DNA样品做好标记，放于指定位置-20℃或-80℃中保存。

而且，所述醋酸钠-冰醋酸溶液为3M的Na+，5M的Ac-。

本发明的有益效果为：

本发明提供的方法相较于离心柱法和磁珠法，大大降低实验成本，相较于离心柱法和磁珠法，大大缩短DNA提取时间，相较于磁珠法，大大提高DNA提取的量。DNA纯度在合理的区间范围之内。提取得到的基因组DNA不影响下游的分子实验。

附图说明

图1为口腔上皮细胞基因组DNA琼脂糖凝胶电泳结果图；

图2为qPCR的扩增曲线；

表1为不同样本口腔上皮细胞基因组DNA浓度、纯度的检测结果。

具体实施方式

下面结合附图并通过具体实施例对本发明作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。