[发明专利]一株牛睾丸传代细胞株的建立及其应用

说明书

本发明涉及一株牛睾丸传代细胞株的建立及其应用。该方法包括：(1)利用新鲜牛睾丸制备原代细胞并建立牛睾丸细胞系ZJS‑1株；(2)采用单层细胞法培养牛睾丸传代细胞生产猪瘟活疫苗；(3)采用悬浮细胞法培养牛睾丸细胞生产猪瘟活疫苗。本发明建立的牛睾丸细胞系用于猪瘟活疫苗生产具有生产工艺简单且稳定、易操作，病毒含量高，批间差异小，质量易控，可显著提高疫苗产量和质量。利用本发明生产的猪瘟活疫苗安全性好、免疫效力高，对猪瘟强毒攻击具有完全的免疫保护作用。

技术领域

本发明涉及一株牛睾丸传代细胞株的建立及其应用，属于兽用生物制品领域。

背景技术

我国目前生产猪瘟兔化弱毒疫苗所用的细胞为牛睾丸原代细胞和猪肾细胞。为了改进猪瘟病毒的培养工艺，特自主研发建立牛睾丸传代细胞株，又称牛睾丸细胞系，在此基础上建立基础种子批和生产种子批，并对其进行系统检定。

猪瘟活疫苗为我国自主研发的安全及效力均优良的活疫苗，在世界范围内广泛应用，用于预防猪瘟病毒的感染。原生产用细胞为牛睾丸原代细胞，需采集新鲜牛睾丸进行制备，近年来随着牛病疫情的日趋复杂，采集新鲜牛睾丸制备生产用细胞存在外源病毒、细菌及支原体污染的风险，猪肾细胞作为生产用细胞是在牛睾丸原代细胞基础上的一个进步，作为猪源细胞，猪源的其他病毒也更容易适应该细胞，并在细胞上增殖，导致猪源病毒污染。这些外源因子的污染对活疫苗的安全性和效力构成严重威胁，对使用动物及环境可能造成巨大的损失。

发明内容

本发明的目的在于改进现有技术存在的不足之处，提供一种用牛睾丸传代细胞生产猪瘟活疫苗的方法。该方法具有生产工艺简单且稳定、易操作，病毒含量高，批间差异小，质量易控，可显著提高疫苗产量和质量，在转瓶细胞生产线和悬浮细胞生产线均可进行生产。利用本发明生产的猪瘟活疫苗安全性好、免疫效力高，对猪瘟强毒攻击具有完全的免疫保护作用。

本发明的技术方案

1.一株牛睾丸传代细胞株的建立，其特征在于该细胞系源自由新鲜牛睾丸制备的原代细胞，经传代后获得一株既适用于转瓶单层细胞培养，又适用于细胞悬浮培养工艺，且仍保持了对猪瘟病毒高度敏感性的牛睾丸传代细胞株，该株传代细胞株被命名为牛睾丸细胞系(Bovine testis cell line)ZJS-1株，已于2016年8月23日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.12699。

2.权利要求1所述一株牛睾丸传代细胞株的应用，其特征在于该株牛睾丸细胞采用单层细胞培养法和猪瘟病毒兔化弱毒株CVCC No.AV1412用于猪瘟活疫苗的制备。

3.如权利要求2所述一株牛睾丸传代细胞株的应用，其特征在于该株牛睾丸细胞采用细胞悬浮培养法和猪瘟病毒兔化弱毒株CVCC No.AV1412用于猪瘟活疫苗的制备。

4.如权利要求2、3所述一株牛睾丸传代细胞株的应用，其特征在于其中的猪瘟病毒兔化弱毒株CVCC No.AV1412是猪瘟病毒的脾淋毒接种良好单层的牛睾丸细胞或悬浮培养的牛睾丸细胞，加入3.5％血清维持液后置培养箱中培养，每日观察细胞状态，4～5日后收获病毒，按此方法继续传代病毒，取二收、三收细胞培养毒液作为生产用毒种。

本发明具体实施方式

1.牛睾丸传代细胞系的建立