[发明专利]一种同时检测兽药中多种抗菌成分的方法

权利要求书

1.一种同时检测兽药中多种抗菌成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1)、制备对照储备液：分别将多种抗菌成分用溶剂A配制成浓度均为1mg/ml的对照储备液；

步骤2)、制备样品溶液：称取兽药样品，用溶剂A配制成样品溶液；

步骤3)、UPLC-PDA检测：分别将步骤1)得到的对照储备液和步骤2)得到的样品溶液注入超高效液相色谱仪UPLC，以PDA为检测器进行梯度洗脱程序，得到对照图谱和样品图谱，所述图谱包括色谱图和光谱图；

步骤4)、比对图谱：将步骤3)得到的样品图谱与对照图谱分别进行比对，得出兽药样品中添加的抗菌成分的种类和添加量；

所述步骤3)UPLC-PDA检测的色谱柱选用Agilent ZORBAX SB-C18 HD；流速：0.2mL/min；柱温：25℃；进样量：1μL；流动相A为体积百分含量为0.05％-0.2％、pH＝3.35-3.45的甲酸水溶液，流动相B为乙腈；所述梯度洗脱程序分为八个阶段：阶段①：0-7min,9％-14％流动相B；阶段②：7-20min，14％-15.5％流动相B；阶段③：20-25min，15.5％-20％流动相B；阶段④：25-30min，20％-24％流动相B；阶段⑤：30-37min，24％-30％流动相B；阶段⑥：37-39min，30％-50％流动相B；阶段⑦：39-39.5min，50％-9％流动相B；阶段⑧：39.5-42min，9％-9％流动相B；

所述抗菌成分为磺胺类药物和喹诺酮类药物，所述磺胺类药物包括磺胺脒、磺胺、苯磺酰胺、磺胺醋酰、磺胺嘧啶、甲氧苄啶、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪钠、磺胺多辛、磺胺甲恶唑、磺胺异噁唑、磺胺苯甲酰、磺胺氯吡嗪钠、磺胺地索辛、磺胺喹噁啉、磺胺苯吡唑、磺胺硝苯；所述喹诺酮类药物包括马波沙星、氧氟沙星、洛美沙星、二氟沙星、培氟沙星、环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述步骤4)的比对图谱具体为：先比对样品色谱图与对照色谱图中是否有保留时间相同的峰；如果没有，说明样品中未添加对照图谱对应的抗菌成分，如果有，再进一步比对该保留时间相同的峰在样品光谱图和对照光谱图中的整体峰型、最大吸收波长是否一致，如果一致，则判断样品中含有对照图谱对应的抗菌成分，得到样品中添加的抗菌成分的种类，如果不一致，则判断样品中不含有对照图谱对应的抗菌成分；进一步计算样品色谱图中该峰的峰面积，得到该抗菌成分的添加量。

3.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，所述溶剂A为乙腈与体积百分含量为0.1％的甲酸水溶液的混合液，其中，乙腈：0.1％甲酸水溶液的体积比为(40:60)-(70:30)。

4.根据权利要求1或2所述方法，其特征在于，所述步骤2)制备样品溶液具体为：称取兽药样品，加入溶剂A，摇匀，超声3分钟以上，室温下0.22μm滤膜过滤，即得。

5.根据权利要求3所述方法，其特征在于，所述步骤2)制备样品溶液具体为：称取兽药样品，加入溶剂A，摇匀，超声3分钟以上，室温下0.22μm滤膜过滤，即得。