[发明专利]一种稳定的抗肝素脂肪酶检测试剂盒

说明书

本发明制备一种稳定的抗肝素脂肪酶检测试剂盒，主要涉及临床医学检测领域，尤其涉及临床上人体中脂肪酶含量的检测。

背景技术

脂肪酶作为水解油脂的主要酶类之一，一般来说天然油脂是脂肪酶的主要底物，脂肪酶作用于油脂时，主要作用是水解油脂中脂肪酸和甘油相连的油脂键，这和其他水解酶的水解作用是不同的。脂肪酶催化作用系统是一种非均相体系，水溶性的酶催化作用发生在水不溶性底物和水的界面上，这种界面上的催化作用机制尚不是很清楚，不能简单用Michaelis2Menten 学说解释酶与底物间的反应机制。有人提出了脂肪酶在油- 水界面上定位的假设，提出了“超底物”的模型，该模型能解释脂肪酶的一些行为，但还需要进一步的实验证明和修正。此外，脂肪酶兼具有逆向催化甘油和游离脂肪酸合成甘油脂活性。

脂肪酶在临床的意义：正常人血液中脂肪酶含量极少，但是突发急性胰腺炎时，2～12h内血液种脂肪酶会显著升高，24h后会达到峰值，可达正常值上限的10倍，甚至50倍，至48～72h可能恢复正常，但随后又可持续升高8 ～ 15 天。由于血液脂肪酶在急性胰腺炎时活性升高的时间早，上升的幅度的大，持续的时间长，故其诊断价值优于淀粉酶。

目前在国内大多实验室主要以滴定法、比浊法和分光光度法为主。分光光度法目前有两类比较常用：①酶偶联显色比色法，多用1，2-甘油二酯为底物，在脂肪酶和单酸甘油酯脂肪酶的催化下，水解生成甘油和脂肪酸，甘油通过甘油激酶作用生成3- 磷酸甘油，再通过甘油磷酸氧化酶/ 过氧化物酶体系和4-AAP 色素原体系产生紫红色。于550nm 波长连续监测吸光度的变化即可计算LPS 活性。此类方法特异性高，通过双试剂也基本可解决内源性甘油的干扰问题。②1，2邻-二月桂宗甘油-3-戊二酸-（6’-甲基试卤灵）-酯设计的连续监测法。该底物在碱性环境中，在脂肪酶和辅脂肪酶作用下，水解生成1，2-邻-二月桂基甘油和戊二酸-6’-甲基试卤灵。后者不稳定，可自发分解生成戊二酸和甲基试卤灵。甲基试卤灵在581nm波长处有吸收峰，连续监测其吸光度变化可定量测定脂肪酶活性。此法具有简便、快速、灵敏。但是酶偶联显色法，工具酶的价格昂贵，而且酶来源少且不稳定，不能解决肝素和胆红素引起的干扰问题很少有厂家用这种方法。

为了解决上述问题，本发明制备一种稳定的抗肝素脂肪酶检测试剂盒，通过引入稳定剂和拮抗物质，在一定程度上解决了试剂的稳定性问题和肝素问题，同时对试剂的抗干扰能力也有一定的提高。

发明内容

本发明制备一种稳定的抗肝素脂肪酶检测试剂盒，该试剂盒在很大程度上解决了市场上同类产品暴露出的一些问题，诸如：试剂稳定性差，抗干扰能力弱，不能检测肝素样本，试剂成本价高等。本发明试剂盒意义主要是在于提供一种稳定性好，抗干扰能力强，能够检测肝素样本，价格低廉的一种新脂肪酶检测试剂盒，不仅能够满足各大型或综合性医院，同时对于乡镇医院同样使用。

检验原理

本发明制备一种稳定的抗肝素脂肪酶检测试剂盒，其反应机理主要是：1,2-邻-二月桂宗甘油-3-戊二酸-(6'-甲基试卤灵）-酯在脂肪酶作用下生成了1,2-邻-二月桂宗甘油、戊二酸和甲基试卤灵。甲基试卤灵能够引起570nm处的吸光度变化，通过监测570nm处的吸光度变化进而监测处甲基试卤灵的含量，通过甲基试卤灵的含量反映出血清中脂肪酶的含量。

应用本发明试剂盒，监测人体血清中脂肪酶含量时，其检测方法(操作以BS-800为例)如下：检测方法为速率法，因子为2200，样本量：试剂R1:试剂R2=4μL:100μL:200μL, 反应温度为37℃；读点设置为21点-27点。

本发明制备一种稳定的抗肝素脂肪酶检测试剂盒，试剂盒是由试剂R1和试剂R2组成的液体型双试剂检测试剂盒，其中试剂R1组成为：

HEPES缓冲液 0.1mol/L

牛黄脱氧胆酸钠20-50m mol/L

氯化钾9g/L

氯仿2.5-10ml/L

硫酸鱼精蛋白5-10g/L

葡聚糖-200002g/L

曲拉通X-405 1%。

试剂R2组成为：

酒石酸缓冲液0.1mol/L

共脂肪酶300-500KU/L

6’-甲基试卤灵 0.2mol/L

proclin-300 1.5ml/L

葡聚糖-2000 5g/L

丙三醇4-10ml/L。

本发明制备一种稳定的抗肝素脂肪酶检测试剂盒，试剂中各组分的选择依据是：