[发明专利]一种高纯度罗汉果苷V的分离纯化方法

说明书

一种高纯度罗汉果苷V的分离纯化方法，包括以下步骤：（1）溶解、离心：取罗汉果粗制品，加水进行溶解，离心，得离心液；（2）超滤、纳滤、浓缩：将离心液进行超滤，纳滤，真空浓缩，得浓缩液；（3）硅胶拌样、洗脱、浓缩：将浓缩液与硅胶混合拌样，干燥，装入硅胶层析柱，洗脱，分段收集目标馏分，浓缩，干燥，得罗汉果苷V干粉；（4）结晶、洗涤、干燥：将罗汉果苷V干粉溶解，过滤，结晶，晶体洗涤、干燥，得高纯度罗汉果苷V产品。按照本发明方法所得高纯度罗汉果苷V产品的纯度≥98.4%，最终收率＞90%；本发明方法打破现有技术的局限，简化工艺流程，操作性强，安全环保，且成本低，适用于工业化生产。

技术领域

本发明涉及一种高纯度罗汉果苷V的分离纯化方法，具体涉及一种以罗汉果粗制品为原料，制得高纯度罗汉果苷V的分离纯化方法。

背景技术

罗汉果味甘性凉，归肺、大肠经，有润肺止咳，生津止渴的功效，适用于肺热或肺燥咳嗽，百日咳及暑热伤津口渴等，此外还有润肠通便的功效。现代医学研究证实，罗汉果含有一种比蔗糖甜300倍的甜味素——罗汉果苷V，热量仅为蔗糖的五十分之一，是一种十分理想的天然甜味剂，可作为糖尿病、肥胖等不宜吃糖者的理想替代糖源。

罗汉果苷V纯度的高低是衡量其甜度和口感的重要指标，高纯度的罗汉果苷V目前在国内外食品、饮料行业备受青睐。

虽然罗汉果提取物在国内早已实现了规模化生产，但是，现有产品中的罗汉果苷V的纯度普遍在60%以下，高纯度罗汉果苷V的制备仅停留在理论和实验室阶段，高纯度罗汉果苷V的批量生产难以实现。

CN1706861A公开了一种高纯度罗汉果甜苷V的制备方法和用途，在纯化步骤采用正相硅胶柱层析和反相硅胶C-18柱串联分离技术，正相硅胶柱层析使用的洗脱剂为氯仿和甲醇，反相硅胶C-18柱使用的洗脱剂为丙酮和水。该方法使用正向硅胶和反向硅胶串联分离，工艺繁琐，规模化难度大、投资高，在技术效果部分对罗汉果苷V的收率和纯度均无具体描述；且使用的溶剂都属于第二类毒性有机溶剂（无基因毒性，但有动物致癌性的溶剂），在食品药品行业不宜使用。

CN 103923152 B公开了一种罗汉果甙 V 的提取方法，是以罗汉果鲜果为原料，经提取、大孔树脂吸附分离、离子交换树脂精制、硅胶精制后浓缩再喷雾干燥，获得终产品罗汉果甙V提取物。该方法采用大孔树脂富集罗汉果糖的各种甙元，而采用水相中硅胶吸附杂质的方法分离纯化，其精制的产品含量最高也只能达到60%，不能将苷V与其它罗汉果甜苷分离开。

CN 101402665 B公开了一种罗汉果苷 V 的制备方法，其中，粗苷采用硅胶柱层析和后续的 C18 反相柱层析，正相硅胶柱层析使用的洗脱剂为二氯甲烷和乙醇，反相硅胶C-18柱使用的洗脱剂为乙腈和水。虽然正相硅胶层析加反相C18柱串联的纯化效果较为理想，但是，最终转移率很低，只有50%左右，而且操作过程复杂，对馏出物需分成小份，如接收的每一小杯为20mL都要频繁进行 HPLC 检测，设备投资高、规模小，不利于实际生产应用。

CN 102659739 A公开了一种白杨黄素二甲醚的提取方法，属于植物有效成分提取分离技术领域，使用硅胶拌样上硅胶层析柱，但其硅胶拌样为实验室常用手法，采用有机溶剂拌样，然后挥干再装柱，存在操作时间长、量少、安全隐患，不适合工业化生产的技术缺陷。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种产品收率、纯度高，工艺简单，操作性强，安全环保，成本低，适用于工业化生产的高纯度罗汉果苷V的分离纯化方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：一种高纯度罗汉果苷V的分离纯化方法，包括以下步骤：

（1）溶解、离心：取罗汉果粗制品，加水进行溶解，离心，得离心液；

（2）超滤、纳滤、浓缩：将步骤（1）所得离心液进行超滤，纳滤，真空浓缩，得浓缩液；