[发明专利]一种ZnT8特异性单链抗体scFv‑C22及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种抗1型糖尿病ZnT8特异性单链抗体scFv-C22及其应用。

背景技术

锌转运体(ZnT)是一组将锌离子由胞内转运出胞外的跨膜蛋白，与ZIP家族蛋白共同维护细胞内外锌离子的平衡。2004年，Cheimienti等首次在ZnT家族中发现ZnT8蛋白，它由SLC30A8基因编码，高度特异的表达在胰腺中，后进一步研究发现ZnT8特异的表达在胰岛β细胞上，在INS-1细胞中过表达ZnT8可促使锌离子的聚集并增强糖刺激后的胰岛素释放。这些研究表明ZnT8在胰岛素的合成和分泌中发挥重要作用。

1型糖尿病(T1D)是由T淋巴细胞介导，以选择性破坏胰岛β细胞为特征的器官特异性自身免疫性疾病。胰岛β细胞上存在着多种自身抗原，如胰岛素，谷氨酸脱羧酶(GAD)，酪氨酸磷酸酶和ZnT8。其中，ZnT8被认为是T1DM的一个重要的自身抗原，Wenzlau等发现部分T1D高危患者发病前2年即可检测到ZnT8自身抗体且长期维持在较高水平。我们前期研究发现ZnT8存在着多个抗原表位可被1型糖尿病患者自身反应性T细胞识别，且ZnT8抗体水平与T1D的发展存在着显著相关性。早期检测ZnT8抗体和ZnT8特异性CD8+T细胞是预测和诊断T1D的重要手段。针对ZnT8靶点的特异性治疗将成为阻止T1D进展的潜在方法。

抗体研究迄今已有100多年历史，1975年Kohler和Milstein创立B淋巴细胞杂交瘤技术，鼠源单克隆抗体被广泛应用于疾病的诊断和治疗，但由于鼠源单克隆抗体对人体有免疫原性，易产生人抗鼠抗体反应(human anti-mouse antibody，HAMA和超敏反应，且由于其分子量较大，难以穿膜等缺点，限制了其在疾病治疗领域的应用。自20世纪八十年代中期，随着分子生物学的技术进展，国外学者建立了噬菌体抗体库技术。由于噬菌体表达的scFv抗体分子量较小，仅为完整抗体分子的六分之一，且具有较好的血管或组织屏障穿透性、半衰期短、结构稳定、不含Fc段，减少了与体内Fc受体结合而带来的不利影响等优势，已广泛地应用于分子生物学及免疫学、药理学等医学领域，是目前的研究热点。但目前尚未见抗1型糖尿病ZnT8特异性单链抗体的相关报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种抗1型糖尿病ZnT8特异性单链抗体。

本发明的另一目的是提供该单链抗体的应用。

本发明的目的可通过以下技术方案实现：

抗1型糖尿病ZnT8特异性单链抗体scFv-C22，包括轻链和重链，

所述的轻链的可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的重链的可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述的抗1型糖尿病ZnT8特异性单链抗体scFv-C22的氨基酸序列优选如SEQ ID NO.5所示。

一种编码本发明所述的抗1型糖尿病ZnT8特异性单链抗体scFv-C22的基因，其中，

编码轻链的可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

编码重链的可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

编码本发明所述的抗1型糖尿病ZnT8特异性单链抗体scFv-C22的基因的核苷酸序列优选如SEQ ID NO.6所示。

本发明所述的抗1型糖尿病ZnT8特异性单链抗体scFv-C22在制备1型糖尿病诊断、治疗和/或预后判断试剂中的应用。

本发明所述的编码编码权利要求1所述的抗1型糖尿病ZnT8特异性单链抗体scFv-C22的基因在制备1型糖尿病诊断、治疗和/或预后判断试剂中的应用。

有益效果：

本发明首次从T1D病人外周血基因中构建了一个库容达1×10⁸的scFv噬菌体抗体库。我们招募了50例初发的T1D患者以保证库的特异性、多样性和代表性。从该库中，我们可以筛选T1D的各种自身抗体。