[发明专利]一种用高效液相色谱法测定阿法替尼中间体含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高效液相色谱分析方法，尤其是一种用高效液相色谱法测定阿法替尼中间体含量的方法。

背景技术

阿法替尼为苯胺奎那唑啉化合物，是一种不可逆的EGFR-HER2双重酪氨酸激酶受体抑制剂，它能不可逆的与EGFR-HER2酪氨酸激酶结合，抑制其酪氨酸激酶活性，进而阻断EGFR-HER2主导的肿瘤细胞信号传导，抑制肿瘤细胞的转移与增殖，促进肿瘤细胞的凋亡。

N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[[(3S)-四氢-3-呋喃基]氧基]-6-喹唑啉基]-4-(二甲基氨基)-2-丁烯酰胺是合成阿法替尼的重要中间体之一，其化学式为C₂₄H₂₅ClFN₅O₃，结构式为：

文献中尚未公开该中间体的分析检测方法，但该中间体的分析检测对反应控制和收率提高有着重要的作用，同时也直接影响着终产品阿法替尼的质量，所以建立一种稳定有效的含量测定方法对该中间体进行质量控制是非常必要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种阿法替尼中间体的含量测定方法，用于阿法替尼中间体的质量控制。

为了实现本发明的目的，发明人通过大量试验，最终获得如下技术方案：

一种用高效液相色谱法测定阿法替尼中间体含量的方法，是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以缓冲盐溶液和乙腈为流动相，梯度洗脱，包括以下步骤：

a、取阿法替尼中间体适量，加乙腈溶解，配制成每1ml含阿法替尼中间体0.08～0.60mg的样品溶液；

b、设置流动相流速为0.8～1.2ml/min，检测波长254nm，柱温为25～35℃；

c、取a的样品溶液10μl注入液相色谱仪，执行梯度洗脱程序，完成阿法替尼中间体的含量测定；

所述色谱柱的规格为C18，4.6×250mm，3μm。

所述流动相是以磷酸调pH为5～6的缓冲盐溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，所述缓冲盐由磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和四丁基硫酸氢铵组成，流动相A中磷酸二氢钠的浓度为0.005～0.015mol/L，磷酸氢二钠的浓度为0.005～0.015mol/L，四丁基硫酸氢铵的浓度为0.003mol/L；以体积比计，按下表进行梯度洗脱：

进一步的，梯度洗脱的设置优选为：

所述的样品溶液浓度优选为0.5mg/ml。

所述流动相A的pH优选为5.5。

所述的流动相A中磷酸二氢钠的浓度优选为0.01mol/L，磷酸氢二钠的浓度优选为0.01mol/L。

所述流动相的流速优选为1.0ml/min，柱温优选为30℃。

实施例中对本发明的方法进行了详细说明，并对本发明的方法进行了方法验证，结果证明：本发明涉及的含量测定方法，可以有效的将阿法替尼中间体及其杂质分开，而且该方法分离度高，重复性及耐用性好，分析时间短，操作简单，结果稳定可靠，从而可用于阿法替尼中间体的质量控制，为最终成品的质量提供有效保障。

附图说明

图1实施例1的阿法替尼中间体HPLC图谱。

图2实施例2的阿法替尼中间体HPLC图谱。

图3实施例3的阿法替尼中间体HPLC图谱。

图4实施例4的阿法替尼中间体HPLC图谱。

图5实施例5的阿法替尼中间体HPLC图谱。

图6实施例9的阿法替尼中间体线性工作曲线。

具体实施方式

以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步的描述，但是本发明的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。

实施例1

仪器与条件：Agilent 1260液相色谱系统，色谱柱：welch Ultimate XB-C18(4.6×250mm，3μm)，检测波长254nm，柱温30℃，流速1.0ml/min，流动相是以磷酸调pH为5.5的缓冲盐溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，所述缓冲盐由磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和四丁基硫酸氢铵组成，流动相A中磷酸二氢钠的浓度为0.01mol/L，磷酸氢二钠的浓度为0.01mol/L，四丁基硫酸氢铵的浓度为0.003mol/L；以体积比计，按下表进行梯度洗脱：