[发明专利]确定或辅助监测癌症进展的个体化标志物

说明书

本发明提供了用于监测非小细胞肺癌病情进展的生物标志物和通过检测这些生物标志物在非小细胞肺癌患者血清中相对含量的变化从而监测非小细胞肺癌进展的方法。该生物标志物是触珠蛋白β链中包含特定位点的唾液酸化糖肽(SGP)，其中唾液酸化糖肽相对强度比值的明显变化是非小细胞肺癌发生进展和或耐药性产生的指示。

技术领域

本发明涉及用于监测医学病症如肺癌临床进展的标志物和方法。通过检测血液中与疾病相关的触珠蛋白β链中包含特定位点的唾液酸化糖肽的相对强度，计算唾液酸化糖肽之间相对强度比值随治疗时间的变化，从而尽早发现肺癌的病情进展，为肿瘤耐药性和或疾病进展提供一组新型的个体化标志物。

背景技术

肺癌在我国的恶性肿瘤中发病率和致死率都是最高的。从组织学上分类，约有85％的肺癌可以归属为非小细胞肺癌，其5年生存率仅为10％-15％。目前肺癌的主要治疗方法包括外科手术、放疗、化疗和靶向治疗等，尽管治疗的方法一直在改进，肺癌患者的病情复发和或远端转移依然是导致死亡的主要原因。表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)是现阶段比较成功的靶向治疗药物。但由于耐药性的产生，使得这些药物通常只对一部分患者有效。因此，治疗过程中监测肺癌患者的疾病进展是至关重要的环节。

目前，临床上主要采用计算机断层扫描和核磁共振成像等影像学技术监测疾病进展。但是，这些技术通常是根据患者肿瘤的大小来评估患者的疾病状态，具有一定的假阳性率，不能及时在肿瘤复发和或转移产生的早期提供信息，对于肿瘤复发和或转移难以起到早期预警作用。因此，评估肿瘤患者预后状况需要一组简单、经济和微创伤的标志物及检测方法。

触珠蛋白作为一种高丰度的急相反应蛋白，其在清除游离血红蛋白、抗炎、抗氧化、抗血管生成、促进免疫调节等方面发挥重要作用。研究表明，多种癌症与体内触珠蛋白的浓度及其糖基化修饰的变化密切相关，而唾液酸化修饰的变化也与癌症的发生和发展有紧密联系。然而，关于肿瘤随访患者血清中触珠蛋白唾液酸化修饰的变化目前还未见报道。申请者利用质谱技术检测并鉴定了血清中的与疾病相关的触珠蛋白β链中包含特定位点的唾液酸化糖肽相对强度，发现肺癌随访患者血清中触珠蛋白β链中包含特定位点的唾液酸化糖肽相对强度比值的变化与疾病复发和或转移密切相关。

发明内容

本发明的目的是提供一组具有简单、经济和微创特点的个体化预警肿瘤复发和或转移的标志物及其检测方法。

本发明利用二维电泳法提取血清中的触珠蛋白β链(见附录1)，经过胰蛋白酶酶解及富集得到唾液酸化糖肽，并采用质谱技术检测并鉴定提取的触珠蛋白β链的唾液酸化糖肽，然后分析唾液酸化糖肽的相对强度，将包含相同糖基化位点的不同的唾液酸化糖肽相对强度进行比值运算，得到唾液酸化糖肽相对强度比值，依据其比值随治疗时间的变化预警肿瘤的复发和或转移的产生。

在进一步详细描述本发明之前，首先要定义下列术语。

定义：将与疾病相关的触珠蛋白β链中唾液酸化糖肽相对强度比值与其起始点相比，变化为1.5倍或0.75时的时间点标记为T1；治疗起始点至T1点的时长命名为触珠蛋白β链的唾液酸化糖肽预估药物反应时长(TLDR)；将临床上监测的疾病进展时间标记为T2(PD)；T1至T2的时长命名为疾病进展时间(TLDP)。

本发明所提供的血清中触珠蛋白β链的提取、酶解、富集、检测及鉴定及其在监测非小细胞肺癌的进展中的应用是通过以下步骤实现的：

1)采用非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳提取血清中免疫炎症相关蛋白复合物；

2)采用变性聚丙烯酰氨凝胶电泳分离复合物中与疾病相关的触珠蛋白β链；

3)将步骤2)中提取的触珠蛋白β链进行胰蛋白酶酶解；

4)将步骤3)中得到的触珠蛋白β链酶解产物利用杨絮进行富集；

5)将步骤4)中富集得到的唾液酸化糖肽进行质谱鉴定；