[发明专利]一种海州常山快速繁育方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组培技术领域，具体涉及一种海州常山快速繁育方法。

背景技术

海州常山（Clerodendrum trichotomum Thunb），是马鞭草科（Verbenaceae）大青属（Clerodendrum）的落叶灌木或小乔木，广泛分布于我国华东、华北、中南、西南各省和台湾等，国外日本、朝鲜及菲律宾北部也有分布。海州常山耐盐碱、耐水湿、抗有害气体，对不良环境有很强的耐受和抵抗能力；枝叶可以杀灭红蜘蛛、棉蚜虫等害虫；种子的含油量也很高；形态上白花、红萼、蓝果，花果期长，是一种抗逆性强，药用价值、经济价值和观赏价值高的树种。

海州常山常生长于山坡、野地等地方，现今栽培应用的还很少。前人研究成果，主要集中在海州常山的抗逆性生理研究方面，对海州常山的引种繁育研究极少。以往海州常山的繁殖多以扦插为主，海州常山组培快繁研究的起步比较晚，培养的途径比较单一，尚缺乏系统性的研究。对海州常山进行组培研究，能为海州常山后续的细胞或分子水平的研究提供基本的实验材料，也能为耐盐机理、花色形成等方面的控制研究奠定基础。目前关于海州常山组织培养方面的研究只停留于外植体直接形成完整植株，未见外植体经历脱分化、再分化间接形成完整植株的报道。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种海州常山快速繁育方法，能短时间内获得大量海州常山小苗。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种海州常山快速繁育方法，包括以下步骤：

1）从健康茁壮的海州常山1年生扦插苗上选取健康、无病虫害的叶片，进行消毒处理；

2）无菌条件下，将处理后的材料接种于诱导培养基上，温度25℃，全黑暗条件下，培养至出愈，诱导的培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，pH5.8；

3）将诱导出的愈伤组织接种于增殖培养基中，温度25℃，光照强度1800-2000 lx，光照时间12 h/d，25d继代增殖一次，增殖的培养基为：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L，pH5.8；

4）将增殖的愈伤组织接种于分化培养基中，温度25℃，光照强度1800-2000 lx，光照时间12 h/d，培养至分化出芽苗，分化的培养基为：MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.01mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.0g/L，pH5.8。

步骤1）中，消毒处理为：先用自来水冲洗30min，轻刷去上面的杂质，然后在无菌操作台上将嫩叶剪成0.5cm×0.5cm大小的方块，并将外植体方块放入75%酒精中消毒15s，无菌水冲洗3-4次，再用0.1%的HgCl₂溶液消毒进行5min，再用无菌水冲洗5-6次。

步骤2）中，30d后诱导出愈伤组织。

步骤4）中，25d后，分化出芽苗。

有益效果：与现有技术相比，本发明的海州常山快速繁育方法，以叶片为外植体进行愈伤组织的诱导、增殖及分化培养，采用诱导的培养基MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.10mg/L经过30d的培养，叶片的出愈率较高，达到66.67%，整个叶片变成愈伤组织团状愈伤，淡黄绿色，状态较好；采用增殖的培养基MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.05mg/L经过25d的培养，增殖明显，愈伤组织的平均大小增大了3倍，达到21.76mm；采用分化的培养基MS+6-BA0.50mg/L+NAA0.01mg/L经过培养成功分化出了芽苗。可为后期的丛生芽诱导和基因改良工作提供大量的实验材料，具有很好的实用性。

附图说明

图1是海州常山叶片愈伤组织分化示意图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明。

实施例1

本实施例的海州常山，以幼嫩叶片为外植体的愈伤组织诱导、增殖及分化，是先从健康茁壮的海州常山1年生扦插苗上选取健康、无病虫害的叶片，进行消毒处理，然后将其在无菌操作台上接种于事先配好的诱导培养基上，1个月后将已诱导出的愈伤组织接种于增殖培养基中进行增殖。

1）新鲜外植体的选取与消毒灭菌