[发明专利]用于检测磺胺类化合物的组合检测试剂及其检测方法

说明书

技术领域

本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种用于检测磺胺类化合物的组合检测试剂及其检测方法。

背景技术

磺胺类药物(SAs)是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，具有抗菌谱广、疗效强等优点，是目前养殖业中最常使用的抗生素之一。由于SAs在体内的作用时间和代谢时间较长，通过任何途径摄入的磺胺都有可能在人体中蓄积，浓度超过一定值后对人体机能会产生危害。SAs药物毒性作用主要体现在肾损伤、致肿瘤作用、过敏反应、造血机能破坏、消化系统障碍等。由于磺胺的危害较大，且在养殖中使用较多，因此欧盟、美国、日本等国家对横胺类药物在动物源性食品中的残留限量要求不断提高，许多磺胺类药物已经被列为禁用兽药。为了保证食品质量安全，需要快速、准确、廉价的多残留方法检测食品中的磺胺类药物残留。磺胺类药物残留的检测方法主要有酶联免疫法、高效液相色谱法、气相色谱-质谱法、高效液相色谱-串联质谱法、毛细管电泳法、生物免疫法等。酶联免疫法和放射免疫法主要用于大规模的筛选工作，容易出现假阳性，一般不用于定量；气相色谱法用电子捕获检测器进行定量分析，具有较高的特异性，但该方法较为繁琐，不易操作；高效液相色谱紫外检测法和毛细管电泳法灵敏度低，特异性差，特别是在低浓度检测时样品基质干扰大，很难准确地定性确认；气相色谱-质谱法虽然灵敏度和特异性都很高，但衍生过程繁琐，不适用于高通量分析。

发明内容

针对上述磺胺类药物检测的现状，本发明的目的是提供了一种用于检测磺胺类化合物的组合检测试剂及其检测方法，本发明提供的组合检测试剂可以检测畜、禽肉、组织及其相关制品和畜、禽尿、唾液等体液生物样品中多达28种磺胺类药物。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明提供了用于检测磺胺类化合物的组合检测试剂，所述组合检测试剂包括：含有多种磺胺类化合物对照品的有机溶剂溶液和蛋白沉淀剂，含有的每种磺胺类化合物对照品在有机溶剂溶液中的浓度均为0.1ng-20ng/mL，所述蛋白沉淀剂为甲醇、乙腈或乙酸乙酯。

进一步的：所述含有多种磺胺类化合物对照品的有机溶剂溶液为含有28种磺胺类化合物的体积比为50％的甲醇溶液；所述28种磺胺类化合物分别为：磺胺甲嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺苯酰、磺胺地索辛、磺胺喹恶啉、磺胺苯吡唑、磺胺硝苯、磺胺嘧啶、磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、周效磺胺、磺胺甲鯻唑、磺胺脒、甲氧苄啶、磺胺甲二唑、磺胺间二甲嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间二甲氧嗪、磺胺索嘧啶、磺胺喹沙啉、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺、磺胺异鯻唑和磺胺二甲鯻唑。

进一步的：所述组合检测试剂还包括流动相添加剂，所述流动相添加剂为甲酸和甲酸铵的复合。

进一步的：所述蛋白沉淀剂为乙腈。

本发明还提供了利用所述的用于检测磺胺类化合物的组合检测试剂的检测方法，所述检测方法包括以下步骤：

(1)生物样品预处理：对待检测样品利用液液萃取法、蛋白沉淀法或滤膜过滤法进行预处理；

(2)取所述含有多种磺胺类化合物对照品的有机溶剂溶液直接进样；获得每种磺胺类化合物的标准曲线；得到线性方程、相关系数和线性范围；

(3)对预处理后的待检测样品进行液相色谱串联质谱检测：

(4)将质谱检测得到的各磺胺类化合物的峰面积，代入步骤(2)中对照品获得的标准曲线，得到对应磺胺类化合物的含量。

进一步的：所述步骤(1)中液液萃取法为：将固体待检测样品粉碎，加水，匀浆，加入的水体积与样品重量比为1:1-6:1；之后匀浆液用乙酸乙酯萃取，离心，35-45℃的条件下将有机相吹干，加入甲醇复融，离心，取上清液用于分析。

进一步的：所述步骤(1)中蛋白沉淀法为：将固体待检测样品粉碎，加水，匀浆；之后匀浆液加入甲醇或乙腈沉淀，所述甲醇或乙腈的加入体积与样品重量比为1:1-6:1；离心，取上清液，微孔滤膜过滤，取滤液用于分析。

进一步的：所述步骤(1)中滤膜过滤法为：将液体待检测样品用微孔滤膜过滤，滤液加入甲醇或乙腈沉淀，所述甲醇或乙腈的加入体积与样品重量比为1:1-6:1；离心，取上清液用于分析。

进一步的：所述步骤(3)中色谱条件为：采用硅胶键合相填料柱，流动相由A相+B相组成：A相为乙腈水，含体积百分比为0.002％-0.1％的甲酸，B相为乙腈，含体积百分比为0.002％-0.1％的甲酸，A相：B相的体积比为1-99％：99-1％。