[发明专利]一种快速检测微孢子虫孢子的方法

说明书

技术领域

本发明属于病原菌检测技术领域，具体涉及一种基于单细胞拉曼光谱直接检测病原菌微孢子虫孢子的方法。

背景技术

微孢子虫（Microsporidia）是一类细胞内专性寄生单细胞真核生物，目前将其归类为真菌。微孢子虫的生活史可分为侵染期（孢子发芽）、繁殖期（裂殖生殖）和孢子形成期等3 个阶段。孢子是微孢子虫的成熟细胞，随寄主粪便排泄到体外而到处扩散，感染新的寄主，而孢子的发芽是微孢子虫侵染寄主的关键起始。

微孢子虫的寄主很广泛，可以感染包括人类在内的无脊椎动物和脊椎动物，引起许多昆虫、水产动物甚至灵长类动物等的严重病害。目前已发现有150多属，1400余种。其中，家蚕微孢子虫（Nosema bombycis，简称N.b）是人类最早发现的微孢子虫，主要寄生于家蚕。家蚕微粒子病就是由N.b感染、寄生引起的一种传染性蚕病，可以通过食下传染或胚种传染，对家蚕具有很强的危害性，被各国列为蚕种生产唯一的检疫病害。随着我国蚕丝业的发展，蚕种生产规模不断扩大，家蚕微粒子病对蚕种和蚕业生产的威胁也日趋严重。家蚕微粒子病是蚕业生产上的毁灭性疫病，家蚕微孢子虫不仅可寄生在家蚕幼虫、蛹、蛾的多种组织内，并能经蚕卵垂直传播给下一代，对蚕业生产尤其是蚕种生产造成严重危害，而且极易导致蚕茧品质和产量的下降，严重影响蚕丝产业链下游经济的发展。因此，对家蚕微孢子虫检测技术的研究是养蚕业中一个非常重要的项目，既具有理论意义，也具有实用价值。

国内外研究者对微孢子虫的检测方法进行了大量的探索和研究，从最早的肉眼鉴定方法发展到显微镜检查以及目前以血清学检测和分子生物学检测为主的检测技术。而对家蚕微孢子虫的诊断方法的研究，包括光学镜检、电镜检查、血清学技术、分子生物学技术等，这些方法各有优缺点。光学镜检虽然相对比较可靠、简便，但是其检测灵敏度较低，一般需要在感染的晚期才能观察到，检测存在极大的滞后性。电镜检查必须经过超薄切片后再进行电镜观察，对技术设备和操作人员的技术要求比较高，目前主要用于科研，尚且不能实用地进行诊断鉴别。分子生物学中的对微孢子虫的检测方法虽然在灵敏度以及特异性等方面比传统的显微镜检法有很大的优势，但是该方法对操作人员的实验技术要求高，观察结果染色时使用的染液对人体也会造成较大的毒性。微孢子虫检测技术的研究方向是实时、快捷、高效、准确和低价。因此，如何建立一种既快速、简便、高效又能够在基层广泛使用的检测方法已迫在眉睫。

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