[发明专利]一种利用适配体检测黄曲霉毒素B1或M1的试纸条

说明书

本发明公开了一种利用适配体检测黄曲霉毒素B1或M1的试纸条。本发明提供了所提供的检测黄曲霉毒素B1或M1的试纸，包括样品吸收垫、标记物垫、反应膜和吸水垫；所述标记物垫包被检测探针，所述检测探针为荧光素标记的黄曲霉毒素B1适配体；所述黄曲霉毒素B1适配体的核苷酸序列为序列1；所述反应膜包括检测区和质控区；所述检测区包被黄曲霉毒素B1半抗原与载体蛋白形成的偶联物；所述质控区包被质控探针，所述质控探针由亲和素偶联生物素标记的黄曲霉毒素B1适配体互补单链DNA分子形成的偶联物。本发明的检测黄曲霉毒素B1或M1的试纸具有灵敏度高、精确定量、特异性强、简单方便和检测时间短的优点。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，尤其涉及一种利用适配体检测黄曲霉毒素B1或M1的试纸条。

背景技术

近年来，我国部分地区频繁出现饲料、牛奶、花生油、粮食等中黄曲霉毒素超标现象，对人体健康构成严重威胁，引起社会各界的高度关注。黄曲霉毒素是来自于黄曲霉和寄生曲霉等所产生的一种次生代谢物，具有急慢性毒性、致突变性、致癌性和致畸性。黄曲霉毒素对家畜和家禽影响很大，特别猪的敏感性最大，主要表现为肝脏肿大受损或癌变、肠道出血、免疫力下降、生长发育不良等危害，我国国家法规对于饲料中黄曲霉毒素含量不得超过20ppb。黄曲霉毒素由约20种相似的化学物质组成，主要包括黄曲霉毒素B1、B2、M1、M2、G1、G2，其中黄曲霉素毒素B1(AFB1)是黄曲霉毒素家族中毒性和致癌性最强的一种，其毒性比氰化钾强10倍，其致癌性比二甲基亚硝胺强75倍。人的原发性肝癌也很可能与黄曲霉毒素有关，被世界卫生组织(WHO)列为一级致癌物，世界各国对黄曲霉毒素B1(AFB1)都作了严格的限量标准。黄曲霉毒素M1(AFM1)是黄曲霉毒素B1的代谢物，其基本结构为一个二呋喃环的氧杂萘邻酮，与黄曲霉毒素B1的致癌性基本相似，但毒性低于黄曲霉毒素B1，然而与氰化钾和砒霜相比，仍属特别剧毒物质，为强致癌剂。

目前，黄曲霉毒素B1或M1的检测方法主要包括薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、酶联免疫吸附法(ELISA)。TLC法虽然具有设备简单的优点，但其灵敏度低。高效液相色谱法具有灵敏度高、分离能力强、特异性好和测定结果可靠等特点，但如果样品成分复杂，在进行液相色谱分离前，需对样品作彻底有效的净化处理，不适合于大批量样品的检测，并且设备仪器昂贵，不易普及。酶联免疫吸附法是目前常使用的一种检测方法，它具有快速、灵敏、可定量、对样品纯度要求不高，特别适用于大批量样品的检测，但由于需要酶标仪和操作熟练的人员以及检测时间相对较长，所以不适合现场快速检测。因此急需开发新的快速简单灵敏的黄曲霉毒素B1或M1的快速检测方法。

核酸适配体作为一种新型识别分子，是通过SELEX技术从1014-1018文库中筛选出来的，具有极高的亲和力和特异性，与抗体相比，具有易于合成制备，性能稳定，便于修饰等优点，已被用于多种物质的检测。目前利用筛选到的AFB1的适配体(也可以检测AFM1)建立了多种检测方法，如胶体金比色法、荧光染料PicoGreen法等，但这些方法容易受到多种基质干扰，灵敏度较低，不适合现场应用。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种检测黄曲霉毒素B1或M1的试纸。

本发明所提供的检测黄曲霉毒素B1或M1的试纸，包括样品吸收垫、标记物垫、反应膜和吸水垫；

所述标记物垫包被检测探针，所述检测探针为荧光素标记的黄曲霉毒素B1适配体；所述黄曲霉毒素B1适配体的核苷酸序列为序列1；

所述反应膜包括检测区和质控区；

所述检测区包被黄曲霉毒素B1半抗原与载体蛋白形成的偶联物；偶联物AFB1-BSA的结构式如图1。

所述黄曲霉毒素B1半抗原能与所述黄曲霉毒素B1适配体结合；