[发明专利]一种基于阳离子交换树脂纯化乌司他丁的方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种基于阳离子交换树脂纯化乌司他丁的方法。

背景技术

乌司他丁系从男性尿中分离纯化出的一种酸性糖蛋白。由于结构中的两个活性功能区均具有很广的抑酶谱，所以能同时抑制胰蛋白酶、磷脂酶A₂、透明质酸酶、弹性蛋白酶等多种水解酶的活性；而且，乌司他丁分解形成的低分子量成分也具有很强的抑制水解酶的作用。乌司他丁不仅是一种广谱的蛋白酶抑制剂，还具有抑制心肌抑制因子的产生、改善休克时的循环状态、稳定溶酶体膜、抑制炎症介质的释放等功能。大量临床试验结果显示，乌司他丁在治疗急性胰腺炎、辅助治疗休克、改善手术刺激引起的免疫功能下降、尤其是减少体外循环并发症等方面有重要的作用，加上其本身来源于人体，无免疫原性，安全性高。

但由于尿液中乌司他丁的含量较少，其分离及纯化工艺成为制约其应用的关键因素。

关于乌司他丁的分离及纯化方法，国内报道较少。经检索，已公开的中国专利申请文献仅21篇。由青岛康原药业有限公司公开的中国专利申请CN2015108204251《一种树脂再生提高柱效纯化乌司他丁的方法及提高乌司他丁复溶性的药物组合物》和CN2014108077092《一种树脂再生提高柱效乌司他丁的方法及含有乌司他丁的药物组合物》均利用阴离子交换柱、亲和层析柱及超滤相结合的方法对乌司他丁粗品进行纯化的方法。本申请人在之前的专利文献CN2006100002002《纯化的乌司他丁及其制备方法和含有该乌司他丁的药物组合物》中采用阴离子交换柱、超滤和金属螯合柱、疏水柱和凝胶柱结合对乌司他丁粗品进行纯化。

上述公开的乌司他丁的纯化方法均采用多次树脂柱进行纯化。但对于一定体积的尿液，纯化工艺越复杂，在一定程度上可以提高乌司他丁的纯度，而乌司他丁的收率却受到影响。如何协调乌司他丁的纯化工艺与其收率及纯度的关系，成为科研人员亟待解决的问题。

阳离子交换树脂作为一种常用的纯化材料，可用于物质的纯化、分离及产品的富集。根据用途的不同，可选择不同结构类型的树脂。例如，卜春苗等人于2006年发表的《强阳离子交换树脂在蛋白质分离纯化中的应用》(《宁夏工程技术》，2006年3月，第5卷第1期)即制备了一种亲水性良好的强阳离子交换树脂用于从鸡蛋清中纯化溶菌酶和从猪心中提取细胞色素G5且取得了较好的效果。

但截止目前，未见有将阳离子交换树脂用于乌司他丁的纯化的相关报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的上述问题，提供一种基于阳离子交换树脂纯化乌司他丁的方法，以在保证乌司他丁的纯度和收率的同时，缩短其纯化工艺，达到节约成本、减少时间和人力成本的目的。

为了实现上述发明目的，本发明提供了一种基于阳离子交换树脂纯化乌司他丁的方法，其具体步骤如下：

1)取澄清尿液，调节pH至6-6.5，加入硅胶，搅拌，过滤，得滤液，调节滤液pH至3-5后，加入壳聚糖和海藻酸盐，搅拌，得混合液1，将混合液1用截留分子量为5×10⁴-7×10⁴的超滤膜1超滤得截留液1；

2)调节截留液1的pH至7-8，过滤，得滤液1，将滤液1调pH至4-8后上阳离子交换树脂柱，然后用洗脱液1洗脱，收集流出液得流出液A；

3)将流出液A用截留分子量为3×10⁴的超滤膜2超滤得截留液2；

4)将截留液2冷冻干燥，即得纯乌司他丁。

优选地，本发明提供的基于阳离子交换树脂纯化乌司他丁的方法，其具体步骤如下：

1)取澄清尿液，调节pH至6-6.5，以硅胶∶尿液＝8-12kg/t的比例加入硅胶，搅拌，过滤，得滤液，调节滤液pH至3-5，以壳聚糖∶尿液＝8-12kg/t的比例向滤液中加入壳聚糖，以重量比为海藻酸盐∶壳聚糖＝20-50％的比例加入海藻酸盐，搅拌，得混合液1，将混合液1在压力为0.1-0.7MPa，温度为4-30℃的条件下，用截留分子量为5×10⁴-7×10⁴的超滤膜1超滤得截留液1；

2)调节截留液1的pH至7-8，过滤，得滤液1，将滤液1调pH至4-8后以80-120mL/min的速度流过阳离子交换树脂，收集流出液，将上述流出液再次以80-120mL/min的速度流过阳离子交换树脂，重复2-3次，收集流出液得流出液A；

3)将流出液A在压力为0.1-0.5MPa、pH＝7-8的条件下，用截留分子量为3×10⁴的超滤膜2超滤得截留液2；