[发明专利]一种假微型海链藻的高活力细胞保藏方法

说明书

本发明公开了一种假微型海链藻的高活力细胞保藏方法，包括以下步骤：1)将微藻接种于培养基中，使微藻细胞数增殖达10⁶‑10⁷个/ml，2)将培养后的藻液进行梯度降温处理；3)在降温同时降低光照时的光照强度，降低幅度为1000‑2000lx/天；4)将藻液置于4‑5℃黑暗条件保存。本发明为优质饵料微藻假微型海链藻的高活力细胞保存方法，采用逐级降温、避光、悬浮藻液高活力活细胞保藏，微藻成活率高，复壮能力强，不易污染，且操作简便易行。

技术领域

本发明属于微藻保藏方法，具体涉及一种饵料微藻假微型海链藻高密度高活力保藏方法。

背景技术

饵料微藻营养全面，最适宜作为水产动物的鲜活饵料；能够提高水产动物存活率，降低育苗成本，满足育苗特殊阶段的营养和生长需求；并能够净化水质，实现水产养殖的可持续发展，因此成为水产养殖业中不可替代的角色。水产养殖动物育苗中，往往需要保障大量优质饵料微藻的供给。但人工培育微藻时，常会面临生长繁殖缓慢，且易被竞争性浮游生物超越其增殖优势，如受杂藻污染或被捕食，造成繁育失败。其中一个重要的原因是繁育起始阶段饵料藻的细胞数少，缺乏竞争优势。如何实现优质饵料的优势增殖是一个函待解决的问题。受季节、气候、养殖生物生长差异等条件的影响，适时、足量提供能够迅速复壮并能快速增殖的高密度高活力起始藻源是养殖成功的重要工艺。其中之一是饵料微藻的高活力高密度保藏方法。

假微型海链藻是第一个被用来进行全基因组测序的真核浮游硅藻，之后作为模式生物被广泛应用于代谢、遗传、毒理、生态以及能源微藻筛选等众多领域的研究；此藻营养丰富，并能够在阴雨天气繁育，是水产养殖育苗中的一种重要优质饵料微藻。

发明内容

本发明的目的是提供一种假微型海链藻的高活力高密度保藏方法，采用逐级降温、降光，在最佳密度下进行高活力保藏。本发明方法的微藻成活率高，复壮能力强，不易污染，且操作简便易行。

本发明的方法，包括如下的步骤：

1)将微藻接种于培养基中，使微藻细胞数增殖达10⁶-10⁷个/ml，

2)将培养后的藻液进行梯度降温处理；

所述的梯度降温处理，是将培养温度从培养环境温度起，每24小时后降低5℃；直至降低到4-5℃；

3)在降温同时降低光照时的光照强度，降低幅度为1000-2000lx/天。

4)将藻液置于4-5℃黑暗条件保存。

其中步骤1)的培养条件，温度23-25℃，光照强度4000-5000lx,光照周期：12h:12h；

其中步骤1)培养基：20mg/L Na₂EDTA,2.5mg/L FeSO₄·7H₂O,100mg/L KNO₃,10mg/L K₂HPO₄,0.25mg/L MnSO₄,0.5×10^-3mg/L维生素B₁₂,5×10^-3mg/L维生素B₁。

利用上述方法，可以实现假微型海链藻在2-6个月中保持高的存活率及快速复壮增殖能力，为生产实践中适时提供高活力高密度的饵料藻源。

附图说明

图1：保种2月后的复壮细胞增殖过程图；

图2：保种2月后的复壮细胞的光合活力变化图。

具体实施方式