[发明专利]超高效液相色谱检测冻干血栓通的方法

说明书

技术领域

本发明提供一种测定血栓通的方法，具体地说，是超高效液相 色谱检测冻干血栓通的方法；属于化学检测技术领域。

背景技术

注射用血栓通(冻干)是用三七总皂苷，加注射用水，灌装，冷 冻干燥，制成的制剂，收载于国家药品监督管理局标准(试行) WS-10460(ZD-0460)-2002。因为世界卫生组织(WHO)、美国食品与 药物管理局(FDA)以及中国食品药品监督管理局(SFDA)等机构已经 把HPLC指纹图谱作为一种可靠的质量控制方法。

发明内容

针对上述不足，本发明的目的是提供一种避免其他杂质干扰， 高效省时，鉴定结果客观准确的检测血栓通的方法。

一种超高效液相色谱检测冻干血栓通的方法，依次包括下述步 骤：

精密称取注射用血栓通0.5g，置l0mL量瓶中，加水稀释至刻 度，0.22μm微孔滤膜滤过，取1μl注入超高效液相色谱仪，所述 的色谱条件如下：

色谱柱采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以含0.5％甲酸 的水为流动相A，乙腈为流动相B，按照的A∶B的不同比例进行梯 度洗脱；洗脱时间20分钟，紫外检测的检测波长287nm，

进一步的，上述的一种超高效液相色谱检测冻干血栓通的方 法，所述的十八烷基硅烷键合硅胶的规格2.1mm×50mm，1.7μm。

进一步的，上述的一种超高效液相色谱检测冻干血栓通的方 法，所述的高效液相色谱仪为岛津超高效液相色谱仪NexeraUHPLC LC-30A。

进一步的，上述的一种超高效液相色谱检测冻干血栓通的方 法，所述的洗脱梯度参数如下：0-1min，1％A、99％B；1-5min，20％- 80％A、80％-20％B；5-7min，30％-70％A、70％-30％B；7-15min，40％- 60％A、60％-40％B；15-20min，30％-70％A、70％-30％B；20-20.1min， 80％A、20％B。

与现有技术相比，本发明提供的技术方案通过该方法可得到准 确的检测结果，避免其他杂质干扰，高效省时，鉴定结果客观准 确，可用于注射用冻干型血栓通的质量控制。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细 说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护 范围所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。

本发明所涉及的到百分含量浓度，除特殊说明外，溶质为液体 的均为体积浓度，溶质为固体的均为质量浓度。

实施例1

一种超高效液相色谱检测冻干血栓通的方法，依次包括下述步 骤：

精密称取注射用血栓通0.5g，置l0mL量瓶中，加水稀释至刻 度，0.22μm微孔滤膜滤过，取1μl注入岛津超高效液相色谱仪 NexeraUHPLCLC-30A，所述的色谱条件如下：

色谱柱采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(2.1mm×50mm， 1.7μm)，柱温35℃，以含0.5％甲酸的水为流动相A，乙腈为流动 相B，按照的A∶B的不同比例进行梯度洗脱；洗脱时间20分钟， 紫外检测的检测波长287nm，

所述的洗脱梯度参数如下：0-1min，1％A、99％B；1-5min，20％- 80％A、80％-20％B；5-7min，30％-70％A、70％-30％B；7-15min，40％- 60％A、60％-40％B；15-20min，30％-70％A、70％-30％B；20-20.1min， 80％A、20％B。

在上述色谱条件下测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷 Rb1对照品，并与样品图谱中相应色谱峰进行比较，发现样品图谱 中保留时间及紫外光谱分别与三七皂苷R1、人参皂苷Re和人参皂 苷Rb1吻合，故样品指纹图谱中鉴定为三七皂苷R1、人参皂苷 Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1。

为了验证本法明提供的技术方案，取同一样品供试液，连续进 样6次，进行精密度实验，图谱中共有峰的相对保留时间的相对标 准差(RSD)分别为0.43％、0.27％、0.61％、0.21％、0.54％、 0.20％、0.23％、0.28％、0.25％、0.19％、0.25％、0.19％。表明方 法精密度较好。

取同一样品供试液，于2、4、8、12h进样，测定3次，指纹图 谱中共有峰的相对峰面积的相对标准差(RSD)分别为1.02％、 1.07％、1.35％、1.34％、1.14％、1.57％、1.51％、1.12％、 1.43％、1.28％、1.21％、1.30％，表明供试液在24h内稳定。