[发明专利]一种抗着丝点抗体IgG的磁微粒化学发光定量测定试剂盒及制备和检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种抗着丝点抗体IgG的磁微粒化学发光定 量测定试剂盒及制备和检测方法。

背景技术

抗着丝点抗体(anticentromereantibody，ACA)是指一类识别存在于着丝点区域的蛋白 质抗原的抗体。目前已知CENP-B、CENP-A和CENP-C是ACA的三种主要自身抗原。ACA 是一些自身免疫性疾病诊断的生物标记物，特别是对于局限性硬皮病(limitedcutaneous systemicsclerosis，lcssc)的诊断具有重要意义。目前ACA是公认的系统性硬皮病诊断和预 后判断的重要生物标记物。

目前临床上抗着丝点抗体IgG的检测有膜条免疫法和酶联免疫吸附法。膜条免疫法应用 的是膜条显色技术，其特点为固定几个项目在同一膜条测定，一般通过手工或者半自动膜条 仪进行实验操作，最终通过肉眼进行定性判定，该技术灵敏度低，反应时间长，检测项目只 能固定搭配组合，灵活性差。酶联免疫吸附法的灵敏度在膜条免疫法基础上有所提升，但仍 然较低，并且线性范围窄，重复性差，反应时间长，仍然不能很好满足临床的应用。

目前，使用磁微粒化学发光分析法在抗着丝点抗体IgG免疫分析产品的应用仍未见。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种抗着丝点抗体IgG的磁微粒化学发光定量测定试剂盒， 本发明提供的试剂盒将化学发光分析技术与磁微粒分离技术相结合，采用生物素和碱性磷酸 酶(ALP)分别标记抗原和抗体，以直径1-3μm的包被链霉亲和素的超顺磁微粒作为分离试 剂。ALP催化底物发光后，通过仪器测量发光强度计算出待测物浓度。该检测方法在传统的 膜条免疫法和酶联免疫吸附法的基础上，将灵敏度和线性范围再提高3-5个数量级，实现真 正意义的定量检测，反应迅速，结果可靠，并能配合全自动化学发光免疫分析仪实现全自动 使用，对于临床诊断具有无可替代的重要价值。

本发明的另一个目的在于提供一种上述试剂盒的制备方法及使用上述试剂盒的检测方 法。

为达到上述目的，本发明采用下述技术方案：

一种抗着丝点抗体IgG的磁微粒化学发光定量测定试剂盒，所述试剂盒包括：

(1)抗着丝点抗体IgG校准品，含抗着丝点抗体IgG和牛血清白蛋白的Tris缓冲液， 所述抗着丝点抗体IgG校准品包含6个水平的液体校准品，所述6个水平的液体校准品中抗 着丝点抗体IgG的浓度分别为0，5，20，50，100，200RU/mL；

(2)抗着丝点抗体IgG质控品，含抗着丝点抗体IgG和牛血清白蛋白的Tris缓冲液， 所述抗着丝点抗体IgG质控品包含2个水平的液体质控品，所述2个水平的液体质控品中抗 着丝点抗体IgG的靶值浓度范围分别为(20±4)RU/mL和(100±20)RU/mL；

(3)试剂1号，含生物素标记的着丝点抗原和牛血清白蛋白的Tris缓冲液；

(4)试剂2号，含碱性磷酸酶标记的羊抗人多克隆抗体和牛血清白蛋白的Tris缓冲液；

(5)磁分离试剂，含有链霉亲和素标记的磁微粒和牛血清白蛋白的Tris缓冲液；

(6)清洗液；

所述试剂盒中试剂1号，试剂2号和磁分离试剂的含量比为1:3:1，所述含量比为体积比。

进一步的，所述磁微粒的材质为Fe₂O₃；所述磁微粒表面包被有羧基基团，包被物中羧 基基团含量大于20wt％，所述磁微粒的大小为1-3μm。

一种制备所述抗着丝点抗体IgG的磁微粒化学发光定量测定试剂盒的方法，该方法包括 如下步骤：

(1)配制抗着丝点抗体IgG校准品：

步骤1)配制抗着丝点抗体IgG校准品稀释液：

将纯化水、Tris、氯化钠和Proclin300加入容器中，充分搅拌至完全溶解，Tris浓度为1wt％， 氯化钠浓度为1wt％，Proclin300浓度为0.2v％；用4M的HCL将溶液的pH值调为7.0-7.5； 将牛血清白蛋白加入容器中，充分搅拌至完全溶解，牛血清白蛋白的浓度为4wt％；再用4M 的HCL将溶液的pH值调为7.0-7.5；用孔径为0.2μm的滤器过滤，得抗着丝点抗体IgG校准 品稀释液，2-8℃保存待用；

步骤2)配制抗着丝点抗体IgG校准品：