[发明专利]一种同时检测抗坏血酸、多巴胺、尿酸、色氨酸和亚硝酸根的方法

说明书

本发明公开了一种同时检测抗坏血酸、多巴胺、尿酸、色氨酸和亚硝酸根的方法。采用由工作电极、参比电极和对电极构成的三电极系统传感器。其中，工作电极采用石墨烯/钽、石墨烯/掺硼金刚石膜、石墨烯/钛；参比电极采用饱和甘汞电极、Ag/AgCl电极、汞/硫酸亚汞电极；对电极采用铂片电极。首先通过不同浓度的五种待测物的混合溶液，通过差分脉冲伏安法获得工作曲线，然后稀释人体血清，使浓度调整到工作曲线范围内，通过差分脉冲伏安法获得的峰电流与工作曲线比较，获得血清中五种待测物浓度。本发明涉及具有可快速同时检测五种待测物浓度的特点，而且灵敏度高，检测限低。

技术领域

本发明涉及一种通过电化学的方法同时检测抗坏血酸、多巴胺、尿酸、色氨酸和亚硝酸根等五种物质。

背景技术

抗坏血酸、多巴胺、尿酸、色氨酸及亚硝酸根这五种物质对人体的新陈代谢起到重要作用，而通过这些物质的检测，可以通过判断坏血病、精神分裂症及老年痴呆症、糖尿病、肝功能衰退、食物中毒等病人体液中所含上述物质的含量，并起到预防作用。

目前，临床医学中常用氧化还原滴定法、分光光度法、尿酸酶－过氧化物酶偶联法、荧光分光光度法、比色法等。在临床应用中，要么对不同物质采用不同的检测手段，要么样品处理过程繁琐，要么使用酶等容易失活的生物物质进行标记，这对检测速度和效果都带来了不利影响。另外，由于各种待测物之间存在着相互作用，只有实时同步测定，才能反应体液内相应物质真实的水平。

临床上体液的检测手段正向低成本、多项同步、高灵敏、准确及快速的方向发展。而电化学传感器是与传感器电极与待测物之间的电化学响应峰电位为定性指标，响应峰电流为定量指标，可同时检测多种物质。

本发明涉及的电化学传感器，其工艺简单、成本低，通过该电化学传感器可以快速同时检测人体体液中所含抗坏血酸、多巴胺、尿酸、色氨酸及亚硝酸根这五种物质的含量。

发明内容

本发明的目的在于构建工作电极、参比电极及对电极三电极系统，同时实现检测抗坏血酸、多巴胺、尿酸、色氨酸及亚硝酸根这五种物质，实现高灵敏度、低检测限的目的。

为了达到上述目的，本发明的技术方案如下：

一种同时检测抗坏血酸、多巴胺、尿酸、色氨酸和亚硝酸根的方法，通过由工作电极、参比电极、对电极三个电极构成的电化学传感器实现，包括以下步骤：

(1)以磷酸缓冲溶液作为底液，配置不同pH值的抗坏血酸、多巴胺、尿酸、色氨酸和亚硝酸根五种待测物混合溶液，电化学传感器的三电极连接电化学工作站插入该溶液中，采用差分脉冲伏安法测试，获得具有5个电化学响应特征峰的电压－电流工作曲线，在不同pH值下对比峰电流的大小，找出最大峰电流的pH值；

(2)以磷酸缓冲溶液作为底液，稀释血清并调整pH值，使血清的pH值调整为上步骤中确定的最大峰电流的pH值，抗坏血酸、多巴胺、尿酸、色氨酸和亚硝酸根五种物质的溶液浓度稀释到步骤(1)工作曲线浓度范围内；

(3)三电极插入步骤(2)溶液中，采用差分脉冲伏安法测试，其中峰电流大小与工作曲线比较，获得稀释后血清中5个待测物的浓度，该浓度再乘上稀释倍数即可获得血清中抗坏血酸、多巴胺、尿酸、色氨酸和亚硝酸根五种物质的浓度。

进一步的，工作电极采用石墨烯/钽电极或石墨烯/掺硼金刚石膜电极或石墨烯/钛电极；参比电极采用饱和甘汞电极或Ag/AgCl电极或汞/硫酸亚汞电极；对电极采用铂片电极。

进一步的，工作电极采用以下步骤实现：(1)在钽或掺硼金刚石膜或钛的基底上预沉积一层镍颗粒，作为石墨烯生长所需的催化剂；(2)采用直流电弧等离子体喷射化学气相沉积技术制备石墨烯，其中反应压强为100Pa～4000Pa，基底温度为500℃～1200℃，生长时间为0.5min～30min，电弧电压为50V～70V，电弧电流为80A～130A。