[发明专利]一种基于CdZnSe三元量子点的光谱型电致化学发光免疫检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种光谱型的电致化学发光(electrogenerated chemiluminescence,ECL)免疫检测方法，尤其涉及一种以CdZnSe三元量子点为标记物的光谱型ECL免疫检测方法，属于ECL免疫检测技术领域。

背景技术

电致化学发光是一种已在生化分析和临床诊断领域获得广泛应用的分析技术。例如，罗氏公司所开发的基于钌联吡啶/正三丙胺体系的ECL试剂盒已经可以用于肿瘤标志物、激素等80余种项目的临床诊断。研究显示，量子点(NCs或QDs)，如CdTe、CdSe等，能够产生ECL辐射，为构建新型ECL生化分析策略提供了重要的物质基础。例如，Liang等人采用近红外CdTe量子点开发了一种近红外的ECL免疫检测方法，并通过夹心免疫反应制得ECL免疫传感器检测甲胎蛋白(参见：Anal.Chem.2012，84，10645-10649)。Liu等人以双稳定剂包被CdSe量子点修饰玻碳电极为载体构建一种新型单色量子点ECL传感策略，并实现对多巴胺的灵敏检测(参见：Anal.Chem.2014,86,2784-2788)。

由于ECL基础和应用研究通常采用检测辐射总强度的理念提高信噪比、提升ECL分析的灵敏度，传统ECL研究极少涉及相关的光谱信息，基于ECL光谱信息的生化传感研究基本处于空白状态。

同时，尽管三元量子点拥有比二元量子点更为优异的光学特性，基于三元量子点的ECL基础研究尚基本处于空白状态，与之相关的ECL生化分析及应用研究上处于待开发状态。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明采用双稳定剂包被策略制备了水溶性的CdZnSe三元量子点，并以该量子点为标记物提供了一种光谱型ECL检测方法。本发明所构建的光谱型ECL检测方法具有灵敏度高和选择性好的特点。

术语说明：

抗原(Ag)：本发明所述的抗原指：甲胎蛋白抗原，癌胚抗原，糖类抗原125，糖类抗原15-3，糖类抗原72-4，糖类抗原19-9，前列腺特异性抗原，游离前列腺特异抗原，爱滋病抗原，乙肝表面抗原，乙肝e抗原，甲状腺球蛋白，肌钙蛋白T抗原，肌红蛋白抗原等常规的抗原。

一抗(Ab₁)：本发明所述的一抗指：对上述抗原对应产生的抗体，本发明对于上述抗原对应的单克隆抗体效果更好。

二抗(Ab₂)：本发明所述的二抗指：对上述抗原和一抗对应产生的二抗。

本发明的技术方案如下：

一种基于CdZnSe量子点的ECL光谱型免疫检测方法，包括步骤如下：

(1)双稳定剂包被的CdZnSe量子点的制备

向氯化镉(CdCl₂)溶液加入醋酸锌(Zn(CH₃COO)₂)和六偏磷酸钠(HMP)，搅拌5min后加入巯基丙酸(MPA)；用NaOH将溶液pH调至8.0，缓慢加入亚硒酸钠(Na₂SeO₃)溶液；将上述溶液加热回流10min后，加入水合肼(N₂H₄·H₂O)，100℃下加热回流，得到双稳定剂包被CdZnSe量子点溶液，取不同回流时间的溶液，4℃避光放置；

(2)CdZnSe量子点标记二抗的制备(Ab₂|CdZnSe NCs)

向双稳定剂包被的CdZnSe量子点溶液中加入含等体积1-乙基-3,3-二甲基氨丙基碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)的磷酸盐(PBS)缓冲溶液，于室温下反应活化30min，离心(12000r/min，6min)后将沉淀重新分散到PBS缓冲溶液中，加入Ab₂，室温下震荡摇匀3h后，加入小牛血清蛋白(BSA)封闭未反应的活性位点；封闭30min后离心，将沉淀重新分散到PBS缓冲溶液中，得量子点标记的二抗(Ab₂|CdZnSe NCs)；

(3)以CdZnSe量子点为标记物构建光谱型ECL免疫传感器

a、将玻碳电极(GCE)用0.3μm的抛光粉(α-Al₂O₃)抛光至镜面，用超纯水洗去电极表面多余的抛光粉，并用氮气吹干；将玻碳电极置入含对氨基苯甲酸(ABA)的缓冲液中，在0.4-1.2V电位区间内、以10mV/s扫速循环伏安扫描两圈，得到表面带有羧基的修饰电极(GCE∣ABA)，用无水乙醇、超纯水依次清洗所得修饰电极；