[发明专利]一种蛋白质免疫印迹信号增强剂

说明书

本发明属于分子生物学领域，主要涉及到一种蛋白质免疫印迹信号增强剂。此增强剂能将蛋白质免疫印迹检测中的信号强度和灵敏度平均提高3～10倍，显著降低背景。此增强剂使用方法简单，并可用于PVDF膜或硝酸纤维素膜，并与底物显色法、化学发光显色法及荧光显色法兼容。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种蛋白质免疫印迹检测的信号增强剂，此蛋白质免疫印迹信号增强剂可以显著增加蛋白质免疫印迹检测过程中的信号强度。

背景技术

蛋白质组学(proteomics)是指以基因组编码的所有蛋白质为研究对象，从细胞或组织整体水平上研究蛋白质的组成及其变化规律，从而深入认识有机体的各种生理和病理。与传统蛋白质研究比较，蛋白质组学研究体现了全面性、整体性、高通量、大规模的特点。蛋白质组学的研究对于已完成基因组计划的理论预测的蛋白质组进行实证分析具有无法替代的重要作用。蛋白质组学技术较为复杂，包括蛋白质分离、鉴定和信息分析三方面的内容。其中，凝胶电泳是分离和鉴定蛋白质的核心技术之一。蛋白质免疫印迹检测技术是继凝胶电泳后的蛋白质组学研究技术之一，其主要是用来识别、量化、并确定特定蛋质白的大小。蛋白质免疫印记技术是由Northern blot和Southern blot演化而来，被称作Westernblot。Western blot的方法首先是使用凝胶电泳分离天然或变性的蛋白质，然后将蛋白质转移到固体承载物上，之后用未标记的或已标记的特异性一抗与转移到固体承载物上的抗原识别并结合，再加入二抗(二抗上标记有酶、荧光、生物素等基团)对结合抗原的一抗进行识别放大免疫信号，最后针对一抗或者二抗上偶联的探针基团(探针种类主要有酶、荧光集团和生物素，蛋白质免疫印迹检测中常使用到的探针种类包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、荧光标记三种)并具有相对应的检测方法。想要完成一次成功的Western blot操作并非易事，主要原因包括目的蛋白丰度低、抗体亲和力弱、表位难以识别等等诸多问题。因此，如何增强免疫印迹膜上的目的蛋白的信号强度是非常重要以及亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明目的之一是提供一种能够显著增强蛋白质免疫印迹膜上目标蛋白信号的方法；

本发明目的之二是提供一种能够显适用于不同载体材料上目标蛋白信号的增强剂；

本发明目的之三是提供一种能够适用于多种显色方法的蛋白质免疫印迹膜上目标蛋白信号的增强剂；

本发明目的之四是提供一种可适用于从多种生物样本中提取的蛋白质的免疫印迹检测过程中的信号的增强作用。

本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：

针对蛋白的免疫印迹检测(Western blot)中抗体亲和力弱、表位难以识别等等诸多问题，本发明人进行了深入研究，并经过长期，反复多次试验，首先发现蛋白免疫印迹检测中经常使用到的固相支持物，主要包括硝酸纤维素膜和聚偏二氟乙烯膜(PVDF膜)两种都是属于海绵状的多孔结构物质，蛋白质转移到这些固相支持膜上面后，有许多蛋白不仅是存在于膜的表面而是进入到孔洞中隐藏起来，因此造成免疫印迹膜上的蛋白难以被一抗识别及结合的现象，一抗的识别及结合少就会导致二抗结合量的减少从而产生免疫信号弱的现象。针对这个现象，我们使用高浓度低pH的甘氨酸溶液可以有效迅速剥离膜支持膜表面的细微的一层干性保护膜，使得藏在支持膜孔洞内更多的蛋白质外露并被一抗识别来增加免疫信号的强度。因此在不同的免疫印迹检测操作的过程中封闭前和二抗反应后都可以采用这种方法增强目的蛋白的免疫信号。此外，由于Tween 20是一种离子表面活性剂，高浓度的Tween20和适量的SDS在低pH的情况下，可以使支持膜上的大多数蛋白质充分变性，使抗原暴露出更多的抗原表位，从而使一抗更加容易接近抗原表位。同时，高浓度的Tween20还可以减少抗原和抗体的非特异性结合，降低了免疫印迹膜的背景，更进一步地增加了免疫印迹膜上蛋白信号的强度。

附图说明