[发明专利]双检测线SAA免疫荧光层析定量检测试剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明提供一种免疫荧光层析定量检测试剂，具体地说，是一种双检测线SAA免疫荧 光层析定量检测试剂及其制备方法；属于体外诊断试剂技术领域。

背景技术

血清淀粉样蛋白A(SerumamyloidAprotein，SAA)，是一种敏感的急性期炎症标志物， 正常人血清SAA值为0-0.78mg/l，当机体受到感染、炎症、损伤、肿瘤等刺激后，肝脏细 胞大量分泌SAA，血清中SAA水平随着机体炎性反应的发展可在5-6小时内迅速升高约 1000倍，8-12h内SAA即可达到峰值，增高幅度可达正常值的2000倍，在临床诊断中当 SAA含量>10mg/l时，才作为急性炎症的标志。当机体的炎性反应被控制以后，SAA迅速 降低至正常水平，正是这种特征使SAA可作为反应机体感染或创伤的等炎症状态的敏感指 标，同时作为炎症恢复的评价指标。临床意义与CRP相类似，检测血液中SAA的浓度水 平，有助于诊断非特异炎症、评估炎症活动程度、监控炎症活动及治疗后效果。

除了急性期由肝脏大量分泌SAA外，在正常的脂肪细胞、肿瘤细胞以及动脉粥样硬化 斑块中的多种细胞也能合成。因此，在过度肥胖处于亚健康状态的人群及患有动脉粥样硬 化的人群中，血清SAA的含量也高于正常人，而处于慢性炎症的状态。SAA不仅仅是炎症 标志物，也是炎症信号触发剂，可诱导IL-6、IL-8和MCP-1等多种促炎性细胞因子的分泌， 促发全身系统性慢性低度炎症的发生，同时SAA能够刺激巨噬细胞、内皮细胞等相关靶细 胞，上调各种炎症因子的表达，进一步加重机体的炎症水平。SAA进入血浆后，能迅速与 HDL结合，形成SAA-HDL复合物，SAA结合到HDL上后能使其更容易与血管上的蛋白 聚糖黏附，从而引起和加重血管动脉粥样硬化的形成。

此外，类风湿性关节炎、结核病、麻风病患者体内SAA浓度的变化是一个慢性升高的 过程，是合成AA-淀粉纤维的先决条件，继而会引发淀粉样变性。因此，能对慢性变化的 SAA进行检测，有利于临床对患者治疗方案的调整。

临床目前针对的是急性期SAA进行检测，而对非急性期，SAA含量低于急性期，却又 明显高于正常人血清的含量，长期处于慢性炎症的患者缺乏快速检测的方法。因此，发明 一种能同时适用于急性期和慢性炎症期SAA含量检测的试纸在个人在诊断、体检等方面的 运用具有重要的意义。

目前，SAA的检测方法主要有以下几种：

酶联免疫吸附法(ELISA)，采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶 与底物产生颜色反应，用于定量测定。采用这种方法进行测定具有较高的灵敏度，但是操 作过程繁琐，每次测值均需要绘制标准曲线，准确度误差大，测定时间较长，仪器昂贵且 需要经过一定专业培训的人员进行操作，因此不符合临床快速检测的要求。

胶体金免疫层析法，该方法操作简单，但灵敏度低，当样本中的含量低时会出现漏检 的情况，通常用于定性或者半定量的测定，不符合临床上进行含量测定的需求，因此受到 一定的限制。

免疫比浊法，利用抗原抗体反应形成一定结构的免疫复合物，根据复合物在溶液中具 有的特殊光学性质进行检测，但在检测时抗原或抗体过量会造成误差较大，并且容易受到 血脂的影响。

荧光免疫层析法，利用荧光物质在特定的激发光照射下发射荧光的特点，具有特异性 强、重复性好的特点，针对急性炎症时SAA含量进行检测，目前已在医学上进行推广，并 且发展迅猛。

中国专利201510583004.1公开了一种CRP/SAA定量联合检测免疫荧光层析试纸及其 制备方法，中国专利201510014077.9公开了PCT/SAA联合快速检测用试纸条及其制备方 法，但是，针对SAA快速的检测免疫层析法中，胶体金疫层析和荧光免疫层析在进行质控 线C的设置时，一般在包被膜4上包被一条抗IgG的单克隆抗体或者是抗IgG的多克隆抗 体，用来捕获胶体金或者是荧光微球标记的单克隆抗体，因此在测值的过程中受层析效果 的影响造成C值的波动较大，起到的作用也仅仅是试纸条检测结果是否有效，在定量检测 的实验中，测值的重复性差。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种能同时提高灵敏度高和检测范围，满足了临 床上对急性炎症、慢性炎症患者体内SAA水平的检测的双检测线SAA免疫荧光层析定量 检测试剂，本发明还公开上述检测试剂的制备方法。