[发明专利]血清中DCD的Elisa检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学检测方法，具体涉及血清中DCD的Elisa检测方法。

背景技术

Dermcidin(DCD)第一次是从人体汗液中分离出来的一种天然活性肽，其 编码基因dermcidin最初被认为在汗腺中特异性表达。DCD在汗腺中表达并分泌 至汗液中，具有抗菌活性。后来Porter等研究发现在前列腺癌细胞、乳腺癌细 胞、胰腺组织、肝细胞中都有dermcidin的表达，并同时证实它是一种潜在的致 癌因子。

随着DCD出现在编码公认的肿瘤存活因子和恶病质因子，它是癌症病人身 上一种重要的潜在治疗靶点。而目前通用的DCD的检测方法存在抗干扰性差的 问题。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供血清中DCD的Elisa检 测方法。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

血清中DCD的Elisa检测方法，包括以下步骤：

1)配制标准溶液：取标准样品，加稀释缓冲液配制一组梯度浓度的标准溶 液；

2)取样：将DCD抗体预包被于孔板；分别取标准溶液和血清样本加至板孔 后依次加入生物素标记抗体；取TMB显色液加入板孔作为对照孔；孔板加上盖， 反应；

3)加含HRP的亲和素：加入洗涤液洗涤，将含HRP的亲和素加入除对照 孔以外的板孔，反应；

4)显色检测：加入洗涤液洗涤，加入TMB显色液，反应；加入TMB终止 液；酶标仪在450nm测定O.D.值；以浓度为横坐标、以步骤1)的标准溶液的 O.D.值为纵坐标作标准曲线；

5)计算浓度：通过标准曲线计算血清样本中DCD的浓度。

作为优选，DCD抗体的获得方法如下：向成年小鼠或大鼠以0.1-0.5mL/kg b.w.的剂量皮下注射DCD进行免疫，第5天以同样的剂量再次免疫，第15天收 集存活小鼠或大鼠的血清，凝胶电泳分离出DCD抗体。

作为优选，所述洗涤液为质量分数为10-20％的吐温水溶液。

作为优选，步骤1)中，所述稀释缓冲液为PBS缓冲液或Tris-HCl缓冲液。

作为优选，步骤2)中，血清样本是经稀释缓冲液稀释1-100倍的血清样本。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：

本发明提供了血清中DCD的Elisa检测方法，该检测方法简单易行，先采 用包被DCD抗体的孔板与DCD反应，再依次与生物素标记抗体、酶标抗体进 行反应，从而形成DCD抗体-DCD-生物素标记抗体-含HRP亲和素的四元复合 物，从而可以避免干扰，检测人和动物血液样品中的DCD的含量，具有较高的 灵敏性和抗干扰性。

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。

附图说明

图1为实施例1的标准曲线图。

具体实施方式

以下具体实施方式中，如未特别说明，所采用的试剂均可通过市售途径获 得，或是通过常规的实验手段可获得。本中心募集了88名志愿者作为受试者。

其中DCD抗体采用以下方式获得：

向成年小鼠或大鼠以0.1-0.5mL/kgb.w.的剂量皮下注射DCD冻干标准品的生 理盐水溶液进行免疫，第5天以同样的剂量再次免疫，第15天收集存活小鼠或 大鼠的血清，凝胶电泳分离出DCD抗体。

本发明提供血清中DCD的Elisa检测方法，包括以下步骤：

1)配制标准溶液：取标准样品，加稀释缓冲液配制一组梯度浓度的标准溶 液；

2)取样：将DCD抗体预包被于孔板；分别取标准溶液和血清样本加至板孔 后依次加入生物素标记抗体；取TMB显色液加入板孔作为对照孔；孔板加上盖， 反应；

3)加含HRP的亲和素：加入洗涤液洗涤，将含HRP的亲和素加入除对照 孔以外的板孔，反应；

4)显色检测：加入洗涤液洗涤，加入TMB显色液，反应；加入TMB终止 液；酶标仪在450nm测定O.D.值；以浓度为横坐标、以步骤1)的标准溶液的 O.D.值为纵坐标作标准曲线；

5)计算浓度：通过标准曲线计算血清样本中DCD的浓度。

实施例1：