[发明专利]一种用于诊断原发性肝细胞癌的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及体外检测技术领域，具体涉及一种用于诊断原发性肝细胞癌的试剂盒。

背景技术

肝癌即肝脏恶性肿瘤，是外科疾病中的常见病和多发病，肝脏恶性肿瘤可分为原发性和继发性两大类。原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，简称HCC)是我国最常见的恶性肿瘤之一，发病率在恶性肿瘤中位居世界第5位，死亡率居第2位。HCC在我国占全球肝癌发病率及死亡率的一半，且发病率正在逐年升高，严重威胁着人类的健康。

目前可作为诊断HCC的补充指标有AFP、CEA，CA242，AFU，GP73，GPC3等。而这些指标存在诊断率不高等等问题。

Dermcidin(DCD)第一次是从人体汗液中分离出来的一种天然活性肽，其编码基因dermcidin最初被认为在汗腺中特异性表达。DCD在汗腺中表达并分泌至汗液中，具有抗菌活性。后来Porter等研究发现在前列腺癌细胞、乳腺癌细胞、胰腺组织、肝细胞中都有dermcidin的表达，并同时证实它是一种潜在的致癌因子。

研究证明，DCD是作为在组织缺氧或氧化性应激状态下前列腺癌细胞，氧化性应激下肝瘤细胞的存活因子。Porter(2003)等证明DCD的表达和乳腺癌细胞的增长和生存有关，DCD被认为是乳腺癌的癌基因。Cunningham等研究了氧化性应激在神经元变性的作用和证明了一种由30个氨基酸组成的生存促进肽，名为Y-P30。后来证明Y-P30是110氨基酸多肽的组成部分，Cunningham称之为DSEP，发现神经元细胞可以增强抵抗氧化性应激。

DCD基因位于12q13.1染色体上，编码不同生物功能的蛋白质。110氨基酸多肽蛋白包含47个氨基酸组成的DCD-1肽和30个氨基酸组成的诱导蛋白酶水解的核心肽，后者和Y-P30是一致的。DCD蛋白与恶病质伴随蛋白和DSEP是一致的。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种用于诊断原发性肝细胞癌的试剂盒。

为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种用于诊断原发性肝细胞癌的试剂盒，包括DCD标准样品和DCD抗体。

作为优选，所述DCD抗体的制备方法如下：向成年小鼠或大鼠以0.1-0.5mL/kg b.w.的剂量皮下注射DCD标准样品进行免疫，第5天以同样的剂量再次免疫，第15天收集存活小鼠或大鼠的血清，凝胶电泳分离出DCD抗体。

作为优选，该试剂盒还包括生物素标记抗体。

作为优选，该试剂盒还包括含HRP的亲和素。

作为优选，该试剂盒还包括TMB显色液、TMB终止液和PBS缓冲液。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：

本发明提供一种用于诊断原发性肝细胞癌的试剂盒，该试剂盒包括DCD抗体和DCD标准品。DCD作为原发性肝细胞癌的血清标志物，具有较高的准确度、较高的可行性和较广的适用性。该试剂盒具有较有较高的准确度。

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。

附图说明

图1为实施例1的DCD的标准曲线图；

图2为检测实施例2的DCD和AFP作为原发性肝细胞癌的血清标志物的ROC曲线图。

具体实施方式

在以下具体实施方式中，本中心收集了33例乙肝肝硬化、82位已确诊的肝癌患者和44例健康对照者的血清样本，通过Elisa方法检测血清中DCD的含量，并采用电化学发光免疫分析法分别检测AFP指标，即目前最常用的原发性肝癌血清检查项目；分别分析以上述DCD和AFP血清标志物的含量分布曲线和ROC曲线，以研究DCD作为原发性肝细胞癌的血清标志物的准确性和可行性。

如未特别说明，以下具体实施方式中，所采用的试剂或仪器设置均可通过市售途径获得。

实施例1：DCD的检测方法

DCD检测采用用于诊断原发性肝细胞癌的试剂盒，该试剂盒包括以下试剂：1、冻干DCD标准样品购自Kamiya Biomedical Company；2、生物素标记抗体；3、含HRP的亲和素；4、TMB显色液；5、TMB终止液；6、PBS缓冲液；7、DCD抗体。

其中，DCD抗体的制备方法如下：向成年小鼠或大鼠以0.1-0.5mL/kg b.w.的剂量皮下注射DCD标准样品进行免疫，第5天以同样的剂量再次免疫，第15天收集存活小鼠或大鼠的血清，凝胶电泳分离出DCD抗体。