[发明专利]一种半乳糖化壳聚糖修饰的免疫醇质体的制备方法

说明书

本发明涉及一种半乳糖化壳聚糖修饰的免疫醇质体的制备方法，将卵磷脂、胆固醇、十八胺混合后溶于乙醇中，旋转蒸发，得到脂质体膜，然后加入抗原蛋白溶液，超声分散，得到负载抗原蛋白的免疫醇质体；利用层层自助装技术，将负载抗原蛋白的免疫醇质体滴加到透明质酸(HA)溶液中，搅拌，得到混合溶液，然后滴加到半乳糖化的壳聚糖(GC)溶液中，搅拌，即得。本发明制备的(GC)修饰的免疫醇质体具有高变形性、高包封率、能够软化角质并完整地渗透皮肤(从而免疫机体使之获得相应抗性)、对皮肤无刺激，性质稳定以及制备方法简单等优点，是构建经皮免疫贴剂的理想载体。

技术领域

本发明属于免疫醇质体的制备领域，特别涉及一种半乳糖化壳聚糖修饰的免疫醇质体的制备方法。

背景技术

经皮免疫(Transcutaneous immunization，TCI)是近年发展起来的一种新型免疫接种策略，它是将抗原和佐剂局部应用于皮肤而诱导产生全身免疫反应的新方法，可以克服目前注射接种方式存在顺应性差、免疫效率低、易产生耐受等的缺陷，有着广阔的应用前景。目前限制其应用的主要障碍是皮肤表层角质层的屏障作用，使疫苗的大分子抗原物质难以通过皮肤表层而进入富含抗原提呈细胞(Antigen-presenting cells，APCs)的活性表皮层和真皮层，因此在不牺牲皮肤完整性的条件下研究一种新型的经皮免疫系统是开发经皮免疫的关键所在。

醇质体(ethosomes)不仅具有低毒性、低免疫性、良好的细胞相容性、可同时装载水溶性、脂溶性和大分子药物等优点，因而在药物递送尤其是透皮给药领域受到广泛关注。溶解在醇质体磷脂层中的高浓度的醇可增强膜的柔性性和流动性,使其在传递过程中可以变形，因此可以通过比其本身更小的间隙，透过紊乱的角质层。另外，醇质体可与细胞膜发生融合,透过细胞膜将药物直接释放到细胞内发挥作用。以醇质体作为经皮免疫载体，可有效的将抗原递送至皮肤的抗原呈递细胞引发免疫应答反应。

在皮肤的活性表皮层存在着树突状细胞-朗格汉斯细胞(未成熟的树突状细胞)，树突状细胞表面有甘露糖受体，该受体可以识别半乳糖基上的环结构，因此，在载有抗原的醇质体表面修饰半乳糖化的壳聚糖((GC))可以增加该系统的靶向性，从而增强免疫效应。透明质酸((HA))和所制得的(GC)都具有良好的生物相容性且带有相反电荷，利用层层自组装技术可以将其静电吸附于醇质体表面，所得的(GC)修饰的免疫醇质体不仅有良好的透皮效率还可以主动靶向树突状细胞从而引发免疫应答，使机体获得特定抗性。

综上所诉，基于醇质体制备技术和层层自组装技术可制得一种半乳糖化壳聚糖修饰的免疫醇质体，能够有效经皮递送抗原，使机体获得相应免疫能力。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种半乳糖化壳聚糖修饰的免疫醇质体的制备方法，本发明操作简便，制备时间短且条件温和，利于大批量生产；所得到的免疫醇质体不仅有良好的透皮效率还可主动靶向树突状细胞有效引发免疫反应，方便应用于免疫接种领域。

本发明的一种半乳糖化壳聚糖修饰的免疫醇质体的制备方法，包括：

(1)将卵磷脂、胆固醇、十八胺混合后溶于乙醇中，旋转蒸发，得到脂质体膜，然后加入抗原蛋白溶液，超声分散，得到负载抗原蛋白的免疫醇质体；

(2)利用层层自组装技术，将负载抗原蛋白的免疫醇质体滴加到透明质酸(HA)溶液中，搅拌，得到混合溶液，然后滴加到半乳糖化的壳聚糖(GC)溶液中，搅拌，即得半乳糖化壳聚糖修饰的免疫醇质体。

步骤(1)中加入十八胺的目的是使醇质体带正电。

醇质体的制备方法为薄膜分散法。

所述步骤(1)中卵磷脂、胆固醇、十八胺的质量比为25:2.5:1。

所述步骤(1)中抗原蛋白溶液的溶剂为乙醇水溶液，其中乙醇:水的体积比为1:9-3:7。