[发明专利]抗PD-L1纳米抗体及其编码序列和用途

说明书

本发明公开了抗PD‑L1纳米抗体及其编码序列和用途。具体地，本发明公开一类抗人PD‑L1的特异性纳米抗体及其VHH链。还公开了编码上述纳米抗体或其VHH链的编码序列、相应的表达载体和宿主细胞，以及生产本发明纳米抗体的方法。本发明纳米抗体不仅具有高亲和力和高特异性，可用于针对PD‑L1的检测及靶向治疗。

技术领域

本发明涉及生物医学或生物制药技术领域，更具体地涉及针对PD-L1的纳米抗体及其编码序列和用途。

背景技术

程序性死亡因子1配体1(programmed death 1 ligand 1，PD-L1)又称CD274，为B7家族成员，是PD-1的配体。PD-L1属于I型跨膜蛋白，共290个氨基酸，包含1个IgV样区、1个IgC样区、1个跨膜疏水区和1个由30个氨基酸组成的胞内区。

与其他B7家族分子不同的是，PD-L1具有负向调节免疫应答的作用。研究发现，PD-L1主要表达于活化的T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突状细胞等，除淋巴细胞外，PD-L1也表达于其他多种组织如胸腺、心脏、胎盘等的内皮细胞，以及各类非淋巴系如黑色素瘤、肝癌、胃癌、肾细胞癌、卵巢癌、结肠癌、乳腺癌、食道癌、头颈癌等。PD-L1在调节自身反应性T、B细胞和免疫耐受方面具有一定广泛性，并且在外周组织T和B细胞应答起作用。PD-L1在肿瘤细胞上的高表达与癌症患者的不良预后相关。

与PD-L1相结合的程序性死亡因子1(programmed death-1，PD-1)又称CD279，是CD28家族成员，其胞质区含有2个酪氨酸残基，靠近N端的1个位于免疫受体酪氨酸抑制基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif，ITIM)中，靠近C端的1个位于免疫受体酪氨酸转化基序(immunoreceptor tyrosine-based switch motif，ITSM)中。PD-1主要表达在活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞和巨噬细胞表面。在正常情况下，PD-1能够抑制T淋巴细胞的功能，促进Treg的功能，从而抑制自身免疫应答，防止自身免疫性疾病的发生。但在肿瘤的发生中，肿瘤细胞表达的PD-L1与PD-1结合后却能通过对淋巴细胞的抑制性作用促进肿瘤的免疫逃逸。PD-L1与PD-1的结合可导致多种生物学变化，引起免疫调控，如能够抑制淋巴细胞的增殖和活化、抑制CD4+T细胞向Th1和Th17细胞分化、抑制炎性细胞因子的释放等。

单克隆抗体在癌症的检测及生物靶向治疗方面成功的应用，引起了肿瘤治疗的变革。然而，传统的单抗(150kD)分子质量过大，难穿透组织，造成肿瘤区域的有效浓度较低，治疗效果不充分；传统的抗体具有很高的免疫原性，而改造的抗体很难达到原来的亲和力。此外，完全人源化的传统抗体开发周期长，生产成本高，稳定性不够等诸多因素限制其在临床中的应用及普及。

纳米抗体是目前最小的抗体分子，其分子量是普通抗体的1/10。纳米抗体除具备单克隆抗体的抗原反应性外，还拥有一些独特的功能特性，如分子质量小，稳定性强、可溶性好、易表达、免疫原性弱、穿透性强、靶向性强、人源化简单，制备成本低廉等，几乎完美克服了传统抗体开发周期长，稳定性较低，保存条件苛刻等缺陷。

然而，目前本领域尚缺乏令人满意的针对PD-L1的纳米抗体。因此，本领域迫切需要开发新的有效针对PD-L1的特异性纳米抗体。

发明内容

本发明的目的就是提供一类有效针对PD-L1的特异性纳米抗体。

在本发明的第一方面，提供了一种抗PD-L1纳米抗体的VHH链，所述VHH链的氨基酸序列如SEQ ID NO.:1-150中任一所示。

在另一优选例中，所述的PD-L1为人PD-L1。