[发明专利]一种铁蛋白修饰冬凌草甲素脂质体的制备方法

权利要求书

1.一种铁蛋白修饰冬凌草甲素脂质体的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：

（1）称取100～200g冬凌草茎和100～200g冬凌草叶，将其斩碎，按固液比1:10加入无水乙醇进行回流提取2～3h，提取2～3次后将提取液合并，在0.08～0.09MPa压力下将提取液减压蒸馏至原体积的5～8%，得浓缩液；

（2）将上述制备得到的浓缩液中分别加入3～5g卵磷脂、0.5～0.9g胆固醇和150～200mL无水乙醇，再加入500～600mLpH为7.3磷酸盐缓冲溶液，混合均匀后，在50～60℃下进行减压浓缩至原体积1/10，浓缩后用高速剪切机在8000～10000r/min转速下预分散处理15～20min，处理后再用高压均质机分别在200bar和400bar压力下均质3～5次，在1000bar压力下均质10～15次，得到冬凌草甲素脂质体混悬液，并加入混悬液质量3～4%葡萄糖作为冻干保护剂，摇晃溶解后得冬凌草甲素脂质体悬浊液；

（3）量取500～600mL新鲜的猪血，向猪血中加入总质量0.5～0.8%柠檬酸钠抗凝剂，离心分离后取上清液，将上清液与浓度为0.1mol/L碳酸铵溶液混合至混合液pH为7.0～7.4，混合后边搅拌边滴加10～20mL浓度为0.1mol/L氯化铁溶液，在0～4℃下继续搅拌2～3h，将搅拌后得到的血清样品置于冰箱中在0～4℃下冰箱保存10～12h；

（4）向上述保存后的血清样品在搅拌的条件下缓慢加入硫酸铵固体，混合至pH为6.5～7.0，搅拌20min后离心分离得上清液；

（5）量取10～20mL上述上清液和步骤（2）的冬凌草甲素脂质体悬浊液按体积1:20混合并置于梨形瓶中，向瓶中加入总体积1～2倍的乙酸乙酯，在35～45℃下减压蒸发得到透明脂；

（6）量取150～200mLpH7.5磷酸盐缓冲液加入梨形瓶中，放入37℃恒温空气浴摇床中，在1800～2200r/min转速下振荡2～3h，振荡后再在120～150W下超声处理15～20min，得到铁蛋白修饰冬凌草甲素脂质体溶液，将其分装于西林瓶中，冷冻干燥得到粉末，并置于0～4℃冰箱中保存即可。