[发明专利]一种用SPE‑HPLC测定枳实或枳壳中酚性化合物的方法

说明书

技术领域

本发明属于药物检测技术领域，具体来说，涉及到一种用SPE-HPLC测定枳实或枳壳中酚性化合物的方法。

背景技术

枳实，中药名；属芸香科植物酸橙及栽培变种或甜橙的干燥幼果。酸橙，芸香科、柑橘属小乔木，枝叶密茂，刺多，徒长枝的刺长达8厘米。叶色浓绿，质地颇厚主产于四川、江西、福建、江苏等地。5～6月间采摘或采集自落的果实，自中部横切为两半，晒干或低温干燥，较小者直接晒干或低温干燥。用时洗净、闷透，切薄片，干燥。生用或麸炒用。《药品化义》：枳实专泄胃实，开导坚结，故主中脘以治血分，疗脐腹间实满，消痰癖，祛停水，逐宿食，破结胸，通便闭。枳壳是《中国药典》收录的草药，药用来源为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培变种的干燥未成熟果实。7月果皮尚绿时采收，自中部横切为两半，晒干或低温干燥。枳壳性苦、辛、酸、温，具有理气宽中、行滞消胀的功效，主治胸胁气滞，胀满疼痛，食积不化，痰饮内停，胃下垂，脱肛，子官脱垂等病症。枳壳在我国多地都有生产，以湖南和江西的产品为佳。

枳实和枳壳中均含有较多的酚性化合物，如橙皮苷、圣草次苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、新橙皮苷、柚皮素、橙皮素、川陈皮素、5-去甲川陈皮素、甜橙黄酮、橘皮素、芹菜苷、野漆树苷、山奈苷、芹菜素、香叶木素、7-羟基香豆素、佛手柑内酯、佛手柑素和橙皮油素。上述酚性化合物具有良好的抗炎、抗氧化、抗癌等作用，其含量成为衡量枳实和枳壳质量的重要参考成分。由于枳实和枳壳中化学成分复杂，而上述酚性化合物的含量偏低且结构较为相似，导致在含量测定时存在较大误差。目前，对枳实和枳壳中的酚性化合物进行测定的文献较少，主要还是停留在一般的高效液相测定上，而且所检测的指标成分也较少。施学骄等曾提出星点设计-效应面法优化枳实总酚酸提取工艺，并进行了含量测定，但该法主要是针对总的酚分进行测定，没有建立对具体成分的含量测定方法。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种用SPE-HPLC测定枳实或枳壳中酚性化合物的方法。

本发明所述的一种用SPE-HPLC测定枳实或枳壳中酚性化合物的方法，所述方法具体步骤包括：

A、酚性化合物的富集：取过60目筛的枳实或枳壳粉末0.4g，准确称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50mL，超声提取30min，放冷，摇匀，滤过，精密量取滤液25mL减压回收至干，用10mL水溶解，以1mL/min的流速过预先以2mL甲醇和5mL水平衡过的固相萃取小柱，然后依次用2mL30％甲醇淋洗，用10mL纯甲醇洗脱，收集纯甲醇洗脱部分定容至10mL，0.22μm微孔滤膜滤过，即得测试液；

B、酚性化合物的测定：

1)色谱条件：Agilent Poroshel 120SB-C₁₈色谱柱(4.6mm×100mm，2.7μm)；流动相A为甲醇，B为0.1％甲酸水溶液，采用梯度洗脱程序：0～4min，30％A；4～23min，30％～33％A；23～28min，33％～44％A；28～40min，44％A；40～44min，44％～63％A；44～48min，63％～65％A；48～50min，65％～73％A；50～56min，73％～96％A；柱温为30℃，流速0.6mL·min^-1，检测波长：283nm，318nm，338nm；