[发明专利]一种匍枝马尾藻无性种苗繁育的方法

权利要求书

1.一种采用组织培养来大量繁育匍枝马尾藻种苗的方法，具体步骤如下：

1)选取生长良好的匍枝马尾藻新鲜藻体，去除藻体表面的杂藻和附着物，再用灭菌过滤海水反复冲洗4-6遍。将藻体置于20-22℃，光照强度2000-4000lx，光周期14D：10L条件下暂养。

2)选取匍枝马尾藻样品中完整的幼嫩侧枝用70-75％酒精消毒5-10秒，然后用质量浓度0.8-1.4％的次氯酸钠消毒处理8-15分钟，再用灭菌过滤海水冲洗2-4遍。将幼嫩侧枝的茎或叶片切段用镊子放入事前准备好的培养液中。

3)培养7-10天后茎或叶片切段切口处生出数簇不定芽，培养液5-7天更换一次，培养14-16天后不定芽形成再生叶片；以再生叶片为外植体继续诱导不定芽，连续诱导5-6代后产生大量不定芽。

4)将不定芽从切段分离，离体培养20-25天，诱导不定芽再生出假根形成完整再生苗，为人工栽培提供大量种苗。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，匍枝马尾藻样品样暂养培养液为灭菌过滤海水，内含0.05-0.1mol/LNaNO₃和0.01-0.05mol/LNaH₂PO₄。

3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，将幼嫩侧枝的叶片横切成3-5mm切段或将幼嫩侧枝的茎横切成2-5mm的切段放入事前准备好的培养液中培养。

4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，不定芽诱导方法是外植体采用PESI培养基，在20-25℃，光照强度1000-4000lx，光照周期的光照∶黑暗＝8-10∶16-14h条件下培养7-10天。

5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，不定芽形成的再生叶片可以连续多代作为再生源诱导不定芽，选取5-10mm的再生叶片横切成2-3mm切段放入事前准备好的培养液中培养。

6.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤4)中，假根诱导方法是不定芽采用PESI培养基+0.1～0.5mg/L6-BA，在24-27℃，光照强度1500-3000lx，光照周期的光照∶黑暗＝10-12∶14-12h条件下培养20-25天。