[发明专利]一种使用超临界流体色谱纯化二十二碳六烯酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种天然产物的纯化方法，特别是二十二碳六烯酸的纯化方法。

背景技术

二十二碳六烯酸，英文名称为Docosahexaenoicacid，英文简称DHA，是人体所必需的一种多不饱和脂肪酸，鱼油中含量较多，一种含有22个碳原子和6个双键的直链脂肪酸，只有其n-3家族的22 :6Δ4c，7c，10c，13c，16c，19c异构体以天然形式大量存在于鱼油中(占脂肪酸总量的10%～15%)，动物的甘油磷脂则含有不等量的该酸，在代谢过程中，可从α亚麻酸生成。

超临界萃取简单介绍：超临界CO₂流体萃取（SFE）分离过程的原理是利用超临界流体的溶解能力与其密度的关系，即利用压力和温度对超临界流体溶解能力的影响而进行的。在超临界状态下，将超临界流体与待分离的物质接触，使其有选择性地把极性大小、沸点高低和分子量大小的成分依次萃取出来。当然，对应各压力范围所得到的萃取物不可能是单一的，但可以控制条件得到最佳比例的混合成分，然后借助减压、升温的方法使超临界流体变成普通气体，被萃取物质则完全或基本析出，从而达到分离提纯的目的，所以超临界CO₂流体萃取过程是由萃取和分离过程组合而成的。

发明内容

本发明采用的技术方案如下：使用裸硅胶、C18、C8、二醇基等硅胶基质类填料作为固定相，超临界CO₂做流动相，甲醇、乙醇、乙腈做夹带剂，纯化的得到纯度大于99%的二十二碳六烯酸，包括以下步骤：

（1）使用甲醇溶解鱼油粗品，0.45um的微孔滤膜过滤；

（2）配置甲醇：乙醇：乙腈=2:3:1的夹带剂；

（3）使用低比例的夹带剂的流动相体系平衡系统20min，然后进样，约50min后开始收集目标组分，收集约10min后，再使用高比例的夹带剂进行洗脱；

（4）将收集的馏分使用旋转蒸发仪进行后处理，得到的白色粉末即为目标产物。

本发明具有以下技术优势：使用超临界流体色谱纯化得到纯度大于99%的二十二碳六烯酸，此方法使用CO₂做流动相，仅添加少量有机溶剂，减少了有机溶剂对环境的污染，绿色环保，同时，制备过程简单，易于操作。

具体实施方式

实施方式1

使用甲醇溶解鱼油粗品，0.45um的微孔滤膜过滤，配置甲醇：乙醇：乙腈=2:3:1的夹带剂，裸硅胶作为固定相，使用超临界CO₂：夹带剂=92:8的流动相体系平衡系统20min，进样，洗脱约50min后开始收集目标组分，收集约10min后，再使用超临界CO₂：夹带剂=8:92的流动相进行洗脱，将收集的馏分使用旋转蒸发仪进行后处理，得到的白色粉末即为目标产物。

实施方式2

使用甲醇溶解鱼油粗品，0.45um的微孔滤膜过滤，配置甲醇：乙醇：乙腈=2:3:1的夹带剂，C18硅胶作为固定相，使用超临界CO₂：夹带剂=95:5的流动相体系平衡系统20min，进样，洗脱约50min后开始收集目标组分，收集约10min后，再使用超临界CO₂：夹带剂=5:95的流动相进行洗脱，将收集的馏分使用旋转蒸发仪进行后处理，得到的白色粉末即为目标产物。

实施方式3

使用甲醇溶解鱼油粗品，0.45um的微孔滤膜过滤，配置甲醇：乙醇：乙腈=2:3:1的夹带剂，C18硅胶作为固定相，使用超临界CO₂：夹带剂=97:3的流动相体系平衡系统20min，进样，洗脱约50min后开始收集目标组分，收集约10min后，再使用超临界CO₂：夹带剂=3:97的流动相进行洗脱，将收集的馏分使用旋转蒸发仪进行后处理，得到的白色粉末即为目标产物。