[发明专利]应用高速逆流色谱分离功劳木中生物碱类化合物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药有效成分的分离纯化方法，具体为应用高速逆流色谱分离功劳木中生物碱类化合物(药根碱、小檗碱、巴马汀、非洲防己碱单体)的方法。

技术背景

功劳木为小檗科植物阔叶十大功劳Mahoniabealei(Fort.)Carr或细叶十大功劳Mahoniafortunei(Lindl.)Fedde的干燥茎，其性味苦，寒，具有清热燥湿、泻火解毒之功效。主治湿热泻痢、黄疸尿赤、目赤肿痛、胃火牙痛，疮疖痈肿。功劳木中生物碱类化合物主要为异喹啉类生物碱，包括药根碱、巴马汀和小檗碱，研究结果表明异喹啉类生物碱可以抑制自由基和脂氧合酶活性从而达到抗炎的作用。此外，生物碱的抗氧化能力还与其抗病性、抗逆性及延缓衰老有关。现代药理研究表明，功劳木还具有一定的逆转肿瘤细胞耐药的作用。

现有关于功劳木中生物碱类单体化合物分离制备的文献方法主要采用反复硅胶柱层析和Sephadex LH-20凝胶柱色谱，其局限性是费时费力、污染环境、样品纯度低，而且反复柱层析对样品有不可逆性吸附作用，分离得到生物碱单体制备效率低、成本较高，难以发展成为制备量大的分离技术。

高速逆流色谱(High-speed Counter-current Chromatography，HSCCC)是近30年发展起来的一种连续的无需任何固体支持物的高效、快速的液液分配色谱分离技术，它避免了固态支持体或载体带来的样品易被死吸附、损耗和变性等各种问题，使用其它液相色谱法进行制备型分离时，其分配效率会显著降低，溶剂消耗量大，HSCCC保证较高峰型分辨度，分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和，节约溶剂。高速逆流色谱能直接进大量粗提样品或合成混合物，分离结果能达到相当高的纯度，已广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。

虽然现有技术中有利用高速逆流色谱分离中药中生物碱的报道，本领域公知，高速逆流色谱分离中所用到的溶剂系统是影响分离结果的关键因素之一，常用到的溶剂有甲醇、石油醚、乙酸乙酯、正己烷、丙酮、氯仿、乙腈等，每一溶剂系统中所使用的溶剂至少为两种，不同中药成分所具有的成分，以及生物碱的种类和数量不一样，中药经过提取得到的生物碱总样的成分不同，所以针对不同的中药如何选择溶剂系统的溶剂种类、各溶剂之间的用量比例以及配合该溶剂系统选择怎样的流速、上样量、转速等等才能得到纯度较高的生物碱单体是没有参考价值的。

非洲防己碱具有兴奋子宫的作用，目前已知的来源为小檗科植物日本小檗Berberis thunbergii DC根茎、毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch根茎、防己科植物黄藤Fibraurea tinetoria Lour根、非洲掌叶防己Jatrorrhiza palmata(DC.)Miers(J.columba.Miers)、罂粟科植物博克尼木Bocconia frutesces Linn叶、番荔枝科植物依南木Enantia chlorantha Oliver根。

目前，还没有从功劳木中分离出非洲防己碱的有关报道，也没有利用高速逆流色谱分离功劳木中生物碱的记载。

发明内容

本发明的目的就是为了解决上述问题，提供一种应用高速逆流色谱分离功劳木中生物碱类化合物的方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种分离功劳木中生物碱类化合物的方法，应用高速逆流色谱分离，所述分离中所用到的条件是：溶剂系统为氯仿：甲醇：0.5mol·L^-1盐酸溶液＝3.5-4.5:1-2:1.5-2.5(优选：4:1.5:2)，高速逆流色谱仪柱体积为200-400(优选300mL)，上样量200-500(优选300mg)，转速300-1000rpm(优选800rpm)，上相为固定相，下相为流动相，流速1.5-2.5mL/min(优选2.0mL/min)，固定相保留率71.67％，检测波长250-260nm(优选254nm)。

所述：功劳木中生物碱类化合物的提取方法：(1)采用乙醇对功劳木药材进行提取，将提取液真空浓缩至无醇味，得总提取物；(2)将总提取物调至酸性，石油醚萃取脱脂后，调整至碱性，搅拌沉淀，即为功劳木生物碱粗提物。

应用高速逆流色谱分离的具体步骤如下：

(1)将溶剂系统，置于分液漏斗中，摇匀后静置分层，待平衡一段时间后将上下两相分开，上相为固定相，下相为流动相；