[发明专利]一种罗汉果苷V含量≥95％的罗汉果提取物的制备方法

权利要求书

1.一种罗汉果提取物的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

步骤一：挑选罗汉果，水洗去除脏污，挤压破碎，按照原料重量kg比蒸馏水体积L为1:3向原料中加入蒸馏水，加热使沸腾，提取0.5～1.5小时，提取3次，合并提取液；

步骤二：在提取液中加入相对原料重量10～15％的质量浓度为0.5％的壳聚糖乙酸水溶液，充分搅拌，将冷却提取液到室温，离心过滤，得到滤液；

步骤三：按照原料重量kg比树脂体积L为1:1～1.2，将滤液按照流速为2～3BV/h过树脂柱，用蒸馏水按照相同流速洗脱树脂柱，弃掉第1～3BV的洗脱液，取第4～6BV洗脱液，真空浓缩至原料重量的1/25～1/20；

步骤四：将浓缩液pH值调节至10～11，在8～12℃冷藏结晶，1周后，离心过滤无定形絮状物，将离心液在2～5℃冷藏，结晶1周，低温离心过滤无定形絮状物，将离心液真空浓缩，干燥得到粗品；

步骤五：按照粗品重量比硅胶重量为1:15～20，径高比为1:8，上硅胶柱层析，先用二氯甲烷：甲醇体积比为100:15，洗脱15BV，去除杂质；再用二氯甲烷：甲醇体积比为100:35洗脱，收集用HPLC检测到的罗汉果苷V≥95％组分，真空浓缩干燥，即得。

2.根据权利要求1所述的罗汉果提取物的制备方法，其特征在于，在步骤一中，所挑选的罗汉果为果皮完整的金黄色的成熟罗汉果。

3.根据权利要求1所述的罗汉果提取物的制备方法，其特征在于，在步骤三中，所述的树脂柱为LSA-700B弱碱性大孔吸附树脂柱。

4.根据权利要求1所述的罗汉果提取物的制备方法，其特征在于，在步骤三至五中，所述真空浓缩的真空度为0.08～0.09MPa。

5.根据权利要求1-4任一项所述的罗汉果提取物的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

步骤一：挑选果皮完整的金黄色的成熟罗汉果，水洗去除脏污，挤压破碎，按照原料重量kg比蒸馏水体积L为1:3向原料中加入蒸馏水，加热使沸腾，提取1小时，提取3次，合并提取液；

步骤二：在提取液中加入相对原料重量10％的质量浓度为0.5％的壳聚糖乙酸水溶液，充分搅拌，将冷却提取液到室温，离心过滤，得到滤液；

步骤三：按照原料重量kg比树脂体积L为1:1，将滤液按照流速为2～3BV/h过LSA-700B弱碱性大孔吸附树脂柱，用蒸馏水按照相同流速洗脱树脂柱，弃掉第1～3BV的洗脱液，取第4～6BV洗脱液，真空浓缩至原料重量的1/20；

步骤四：将浓缩液pH值调节至10.5，在10℃冷藏结晶，1周后，离心过滤无定形絮状物，将离心液在4℃冷藏，结晶1周，低温离心过滤无定形絮状物，将离心液真空浓缩，干燥得到粗品；

步骤五：按照粗品重量比硅胶重量为1:18，径高比为1:8，上硅胶柱层析，先用二氯甲烷：甲醇体积比为100:15，洗脱15BV，去除杂质；再用二氯甲烷：甲醇体积比为100:35洗脱，收集用HPLC检测到的罗汉果苷V≥95％组分，真空浓缩干燥，即得。

6.权利要求1-5任一项所述的罗汉果提取物的制备方法所制得的罗汉果提取物，其特征在于，其中汉果苷V含量≥95％。