[发明专利]一种测定水环境中抗生素的方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测抗生素的领域，特别是涉及一种在地表水和地下水样品中，能够检测出22种抗生素的抗生素含量的方法。

背景技术

药物和个人护理品(PharmaceuticalsandPersonalCareProducts，PPCPs)包括治疗疾病、保障健康的人用和兽用药物，洗浴、护肤等个人护理用品以及香薰、消毒剂等日用化学品，是一类对生态环境和人体健康具有潜在危害的新兴污染物，其环境存在、风险评价和毒理学等方面的研究引起了环境科学领域的广泛关注。环境中PPCPs的来源非常广泛，制药厂、医院、畜禽养殖场、人类日常生活产生的废水和固体废物中都含有大量的PPCPs，并以污水、固体废物等形式进入环境。PPCPs是一类极性或弱极性有机污染物，容易存在于水体中，因此水环境中PPCPs的研究备受关注。兽用抗生素作为PPCPs的一类，被广泛应用于畜牧养殖、水产养殖等领域，其生产和使用量不亚于人用药物。

在目前的相关研究中，兽用抗生素通常使用固相萃取和液相色谱串联质谱(SPE-LC-MS/MS)法分析，方法主要基于EPA1694优化获得。现有的检测法规和大多数实验室，均使用典型的内标法对几种或十几种目标物进行分析，内标和目标物之间存在结构和性质差异，在前处理过程中的损耗、色谱保留行为及响应强度均存在较大差异，导致分析方法检出限较高、稳定性较差，无法对低浓度抗生素准确定量。并且一些抗生素本身具有稳定性差的特点，使用内标法进行测定时，样品的保存时间较短，对分析测定要求较为苛刻：采集的样品需避光低温保存，尽量在3天内完成前处理、45天内完成仪器分析测定。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种环境样品中22种抗生素的分析方法，可以准确测定环境样品中的抗生素含量，并有效补偿抗生素因降解而导致的浓度变化。从而解决现有的测定方法无法准确测定环境样品中的抗生素含量和延长保存时间的问题。

为解决上述技术问题，本发明引入更多的同位素内标，改进原有分析方法，建立多同位素内标的分析方法，做到大多数目标物都有对应的同位素标记物作为内标，对应无法购买同位素标记物的目标物，选择结构、性质相近物质的同位素标记物作为内标。建立灵敏度更高、检测限更低、稳定性更强的多同位素内标的分析方法。

本发明中一种环境水样品中抗生素的测定方法，其特征在于，包括富集步骤、分离净化步骤、样品检测步骤，所述的富集步骤包括将待测水样过滤处理后，向其中加入n种同位素提取内标，n为1以上22以下的整数，优选4～22，更优选4～16。。

本发明所述的测定方法，其特征在于，所述的富集步骤还包括将含有同位素净化内标的水样用固相萃取小柱进行富集，得到含有抗生素的萃取小柱，小柱优选亲水亲脂型固相萃取小柱。

本发明所述的测定方法，其特征在于，所述的富集步骤还包括老化步骤。

本发明所述的测定方法，其特征在于，所述的分离净化步骤包括：将含有抗生素的萃取小柱用高纯水清洗，抽真空1～2小时后甲醇进行洗脱，收集洗脱液，浓缩定容后得到净化试样。

本发明所述的测定方法，其特征在于所述的样品检测步骤用HPLC-MS/MS仪器对所述净化试样进行分析测定。

本发明所述的测定方法，其特征在于，所述的分离净化步骤还包括：将得到的所述净化试样经浓缩后含0.025％甲酸的甲醇/水定容至500μL，加入13C-Atrazine的进样内标后涡旋混合均匀，用0.22μm的尼龙针筒过滤器过滤后待测，其中甲醇与水的体积比为1：1。

本发明所述的测定方法，其特征在于，所述分析检测步骤检测条件采用HPLC-MS/MS仪器对所述净化试样分别进行分析测定，采用的测定参数为：

HPLC检测条件为进样体积10μL；柱温40℃，色谱柱为C18液相色谱柱，规格为3.5μm×3.0mm×150mm，流动相为含0.01％甲酸的高纯水和乙腈，流速为0.40mL/min，质谱条件为电喷雾电离源ESI，多反应监测模式MRM。

本发明所述的测定方法，其特征在于，所述的抗生素种类选自磺胺类、解热止痛药、四环素类、青霉素类、大环内酯类、林可酰胺类中任意一种以上。

本发明所述的测定方法，其特征在于，所述抗生素为，磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲异恶唑、磺胺二甲异嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺喹噁啉、磺胺二甲嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺甲噻二唑、磺胺间甲氧嘧啶、对乙酰氨基酚、四环素、金霉素、青霉素G、红霉素、克拉霉素、罗红霉素、泰乐菌素、克林霉素、林可霉素。