[发明专利]半滑舌鳎补体成分C5a的重组蛋白及其应用

说明书

本发明涉及分子生物学领域，具体的说是半滑舌鳎补体成分C5a(CsC5a)的重组蛋白及其应用。半滑舌鳎补体成分C5a的重组蛋白以半滑舌鳎cDNA为模板，用引物C5F1和C5R1进行PCR扩增补体成分CsC5a基因，扩增产物经诱导表达、纯化即为重组蛋白。本发明补体成分CsC5a重组蛋白能够显著促进免疫细胞吞噬作用，提高鱼类的抗细菌或抗病毒能力。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的说是半滑舌鳎补体成分C5a(CsC5a)的重组蛋白及其应用。

背景技术

补体因子5(Complement factor 5,C5)是补体系统的一个成分。人类C5蛋白由α、β两条多肽链通过二硫键组成,分子量为190kDa。C5靠近N端的第74-75位精氨酸-亮氨酸键为C5转化酶作用的部位。补体系统通过三条途径(经典途径、旁路途径和凝集素途径)激活后，均生成C5转化酶。C5蛋白在C5转化酶的作用下裂解为C5a和C5b两个片段。C5a是C5的α链的N端约8-10kD的肽段，是炎症反应的重要介质和趋化因子。C5a通过与细胞表面的C5a受体结合而激活相应的信号通路，剌激白细胞产生呼吸爆发、趋化效应等炎症反应，从而辅助激活机体的先天性免疫，促进获得性免疫应答。目前，C5和C5a已经在虹鳟和鲤鱼等鱼类中报道，但是它们在鱼类中的应用性研究尚缺乏。

发明内容

本发明目的在于提供一种半滑舌鳎补体成分C5a的重组蛋白及其应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种半滑舌鳎补体成分C5a的重组蛋白，半滑舌鳎补体成分C5a的重组蛋白以半滑舌鳎cDNA为模板，用引物C5F1和C5R1进行PCR扩增补体成分CsC5a基因，扩增产物经诱导表达、纯化即为重组蛋白，所述C5F1为5’-GATATCATGGAGAAGAGGATAAAAGCGGCA-3’；C5R1为5’-GATATCGCCGAGGACGAGGGTTTCCTCT-3’。

一种半滑舌鳎补体成分C5a的重组蛋白的应用，所述半滑舌鳎补体成分C5a的重组蛋白可用于制备增强外周血淋巴细胞的吞噬作用的制剂。

一种半滑舌鳎补体成分C5a的重组蛋白的应用，所述半滑舌鳎补体成分C5a的重组蛋白可用于制备抑制细菌或病毒感染的制剂。

细菌为哈氏弧菌，是鱼类常见的致病性细菌，能感染多种养殖鱼类包括牙鲆、大菱鲆、半滑舌鳎等。

病毒为细胞肿大病毒，是一种严重危害养殖鱼类的病毒，能感染大菱鲆、条石鲷、半滑舌鳎等。

本发明具有如下优点：本发明的补体成分C5a重组蛋白，能够显著提高外周血淋巴细胞的吞噬能力和增强鱼类的抗细菌及抗病毒能力。

附图说明

图1为本发明实施例提供的重组补体成分C5a(命名为rCsC5a)电泳图。泳道1，分子量标准；泳道2,补体成分rCsC5a。

图2为本发明实施例提供的重组补体成分rCsC5a的促吞噬作用。A,半滑舌鳎外周血淋巴细胞(peripheral blood leukocytes，PBL)。B，PBL+FITC-标记的哈氏弧菌。C,PBL+FITC-标记的哈氏弧菌+rCsC5a。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例旨在对本发明进行举例描述，而非以任何形式对本发明进行限制。

在本发明实施例中所涉及到的常规性实验方法均采用如下方法：

1.质粒提取、DNA(PCR)产物纯化、DNA片段从凝胶中回收皆使用“天根生化科技(北京)有限公司”的相应试剂盒。